组织匀浆制作步骤及RNA 提取 1、 取组织块（0.2g~1g）最少可到 2～5mg，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤 纸拭干，称重，放入 5 或 10ml 的小烧杯内 2、用移液管量取预冷的匀浆介质（ph7.4,0.01mol/L Tris-HCL, 0.0001MOL/LEDTA-2Na,0.01mol/L 蔗糖 0.8％的氯化钠溶液）或者用 0.86％冷生理盐水，匀浆介质或生理盐水的体积总量应该是组织块重量的 9 倍，用移液管或移液器取总量的 2/3 的匀浆介质或生理盐水于烧杯中，用眼科小剪尽快剪碎组织块（天然时操作要在冰水浴中进行，将盛有组织的小烧杯放入冰水中）。 3、匀浆的方式有多种：手工匀浆、机器匀浆、超声匀浆、反复冻融。 手工匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的 1/3 匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8 分钟），充分研碎，使组织匀浆化。 机器匀浆：用组织捣碎机 10000～15000r/min 上下研磨制成10％组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10 秒/次，间隙30 秒，连续3～5 次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。 超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用 Soniprep150 型 超声波 发 生器以 振幅 14 微 米 超声处 理 30 秒使细 胞 破 碎，也可用国 产 超声波 发 生仪 ，用 40 安 培 ，5秒/次，间隙10 秒反复 3～5 次。 反 复 冻 融 ： 培 养 或 者 分 离 的 细 胞 可 以 用 以 上 的 方 法 匀 浆 ， 也 可 以 反 复 冻 溶 3次 左 右 （ 即 让 细 胞 加 适 量 的 低 渗 液 或 者 双 蒸 水 放 低 温 冰 箱 中 结 冰 ， 溶 解 ， 再 结 冰 ，再 溶 解 ， 反 复 3 次 左 右 ） ， 但 有 部 分 酶 活 力 会 受 影 响 。 取 少 量 组 织 匀 浆 做 涂 片 （ 直 接 涂 片 、 染 色 均 可 ） ， 显 微 镜 下 观 察 细 胞 是 否 磨破 ， 若 没 有 破 则 可 以 延 长 匀 浆 时 间 或 增 加 冻 融 次 数 。 4、 将 制 备 好 的10％ 匀 浆 用 普 通 离 心 机 或 低 温 低 速 离 心 机3000r/min 左 右 离心 10～ 15 分 钟 ， 若 检 测ATP 酶 ， 则 只 需 要10...
VIP
