紫外线诱变选育α-淀粉高产菌株 一、实验目的 1.学习菌种的物理因素诱变育种基本技术。 2.通过诱变技术筛选出高产ɑ-淀粉酶 的菌株。 二 、实验原 理 紫外线是 一种最 常 用 有 效 的物理诱变因素，其 诱变效 应 主 要 是 由 于 它 引 起 DNA 结 构 的改 变而形 成 突 变型 。紫外线诱变， 一般 采 用 15W 或 30W 紫外线灯 ， 照 射 距 离 为 20-30cm， 照 射 时 间依 菌种而 异 ， 一般 为 1-3min， 死 亡 率 控 制 在 50％ -80％ 为 宜 。被 照 射 处 理的细 胞 ， 必 须 呈 均匀 分 散 的单 细 胞 悬 浮 液 状 态 ， 以 利 于 均 匀 接 触 诱变剂 ， 并 可 减 少 不 纯 种的出现 。同 时 ， 对 于细 菌细 胞 的生 理状 态 则 要 求 培 养 至 对 数 期 为 最 好 。本实验以 紫外线处 理产淀粉酶 的枯 草 杆菌， 通过透明圈法初筛， 选择淀粉酶 活力高的生 产菌株。 三、实验材料 1. 菌种 产淀粉酶 枯 草 芽孢杆 菌 2. 器材 装有 15W 或 30W 紫外灯 的超净工作台、电磁力搅拌器（含转子）、低速离 心机 、培 养 皿 、涂 布 器、10mL 离 心管 、（1、5、10mL）吸 管 、250mL 三角 瓶 、恒 温 摇 床 、培 养 箱 、直 尺 、棉 签 、橡 皮 手 套 、洗 耳 球 3. 培 养 基和 试 剂 ① 无 菌水 、75%酒 精 ② 0.5％ 碘 液 碘 片 1g、碘 化 钾 2g、蒸 馏 水 200mL， 先 将 碘 化 钾 溶 解 在 少 量 水 中 ， 再 将 碘片 溶 解 在 碘 化 钾 溶 液 中 ， 待 碘 片 全 部 溶 解 后 ， 加 足 水 即 可 。 ③ 选择培 养 基 可 溶 性 淀粉2g， 牛 肉 膏 1g， NaCl 0.5g， 琼 脂 2g， 蒸 馏 水 100mL， pH6.8～7.0， 121℃ 灭 菌20 min。 ④ 肉 汤 培 养 基 牛 肉 膏 0.5g， 蛋 白 胨 1g， NaCl 0.5g， 蒸 馏 水 100mL ， pH7.2～ 7.4， 121℃灭 菌20 min。 四 、实验步 骤 1.菌体 培 养 取 枯 草 芽孢杆 菌一环 接 种于 盛 有 20mL 肉 汤 培 养 基的250mL 三角 瓶 中 ， 于 37℃振 荡 培 养 12h， 即 为 对 数 期 的菌种。 2.菌悬 液 的制 备 取 5mL 发 酵 液 于 10mL 离 心管 中 ...
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