天津天士力集团研究院药理所 文件编号： 1 常用免疫组织化学染色方法 ( 一)、ABC 法：(注，下面各种方法，均为手工操作，如没特别说明，均在室温下进行) 1.切片经二甲苯Ⅰ 5 分钟。 2.切片经二甲苯Ⅱ 5 分钟。 3.无水酒精Ⅰ 30 秒。 4.无水酒精Ⅱ 30 秒。 5.95%酒精Ⅰ 30 秒。 6.95%酒精Ⅱ 30 秒。 7.90%酒精 30 秒。 8.80%酒精 30 秒。 9.70%酒精 30 秒。 10.自来水洗。(后面的切片脱蜡至水一般都是 1-10) 11.0.3%H2O2 甲醇处理切片10-20 分钟。 12.水洗。 13.抗原修复。 14.PBS 洗 3 次，1 分钟/次。 15.加入血清孵育 20 分钟。 16.摔干血清，加入一抗 60 分钟。 17.PBS 洗 3 次，2 分钟/次。 18 加入二抗孵育 30 分钟。 19.PBS 洗 3 次，2 分钟/次。 20.加入 ABC 复合物，孵育 30 分钟。 21.PBS 洗 3 次，2 分钟/次。 22.DAB-H2O2 孵育切片5-10 分钟。 23.PBS 洗，水洗。 24.Harris 苏木素染核 5-10 分钟。 25.水洗，分化，蓝化，脱水，透明并封固。 (二)、LSAB 法。(SP 法)(Labelled streptav idim biotln) 1.切片脱蜡至水。 天津天士力集团研究院药理所 文件编号： 2 2.0.3%H2O2 甲醇处理切片10-20 分钟。 3.水洗。 4.抗原修复。 5.PBS 洗 3 次，1 分钟/次。 6.加入血清孵育 10 分钟。 7.摔去血清，加入一抗孵育 30-60 分钟。 8.PBS 洗 3 次，每次 2 分钟。加入二抗，孵育 20 分钟。 9.PBS 洗 3 次，每次 2 分钟。 10.加入 SP 复合物孵育 20-30 分钟。 11.PBS 洗 3 次，每次 2 分钟。 12.DAB-H2O2 孵育 5-10 分钟。 13.PBS 洗，水洗。 14.Harris 苏木素染核 5-10 分钟。 15.水洗，分化 ，蓝化，脱水，透明并封固。 (三)真空负压 LSAB 法 1.切片脱蜡至水。 2.0.3%H2O2 甲醇真空负压处理5min. 3.水洗。 4.如果需要，可进行抗原修复。 5.PBS 洗 3 次，每次 1 分钟。 6.加入正常血清真空负压处理5min。 7.摔干血清，加入第一抗体，真空负压处理5 分钟。 8.PBS 洗 3 次，每次 2 分钟。 9.加入二抗(即连接抗体)真空负压处理5 分钟。 10.PBS 洗 3 次，每次 2 分钟。 11.加入链卵蛋白复合物，真空负压处理 5 分钟。 12.PBS 洗 3 次，每次 2 分钟。 13.DAB-H2O2 孵育 5-10 分钟。 14.PBS 洗，水洗。 天津天士力集团研究院药理所 文件编号： ...
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