实验一 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 [实验原理]（供参考，试剂盒的Solution SS 成分未知） 细菌处于容易吸收外源DNA 的状态叫感受态。转化是指质粒DNA 或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。其原理是：在0℃下的CaCl2 低渗溶液中，细菌细胞膨胀成球形。转化缓冲液中的DNA 形成不易被DNA 酶所降解的羟基—钙磷酸复合物，此复合物粘附于细菌细胞表面。42℃短时间热处理（热休克），可以促进细胞吸收DNA 复合物。将处理后的细菌放置在非选择性培养液中保温一段时间，促使在转化过程中获得的新的表型 (如 Amp 抗性) 得到表达。然后再涂布于含有氨苄青霉素的选择性平板上，37℃培养过夜，这样即可得到转化菌落。 [仪器、材料与试剂] (一)仪器 1．小型高速离心机 2．恒温摇床 3．恒温箱 4．‐20℃冰箱 5．恒温水浴器 (二)材料 1．氨苄青霉素 2．大肠杆菌DH5a3．pUC194．1.5mL 离心管 5．枪头、枪 6．试管、培养皿 (三)试剂1．快速感受态细菌制备试剂盒（申能博彩公司产品）2．LB 培养液在950mL 去离子水中加入：胰蛋白胨 (tryptone) 10g 酵母提取物 (yeast extract) 5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质完全溶解，用 Na0H 调节 pH 至 7.0，加入去离子水至总体积为1L，121℃湿热灭菌20min。 3．氨苄青霉素(Amp)，用无菌水配制成100mg／mL 溶液，置‐20℃冰箱保存。 [实验步骤] 1．从大肠杆菌DH5a 平板上挑取一个单菌落接于2mL LB 培养液的试管中，37℃振荡培养过夜。 2．取 50mL 菌液转接到一个含有 5mL LB 培养液锥形瓶中，37℃振荡培养 2 小时。 以下步骤按修改后的试剂盒说明书进行。 3．用灭菌的枪头取 0.5mL 的大肠杆菌培养物于1.5mL 灭菌离心管中，冰上放置 3 分钟后，加入0.5mL 预冷的Solution SS。在冰上小心地用 1mL 枪头将细胞悬浮起来。注意：1mL 的取液器设定在500mL。悬浮细胞要轻，防止细胞进入枪内。 4．将上述细胞分装于1.5mL 离心管 (离心管要在放在冰上预冷) 中，每管 0.1mL。细胞可以立即使用或储存。 5．将感受态细胞迅速转移到 ‐20℃或更低的低温冰中。注意：在转移过程中要防止温度升高，解决的办法之一是在塑料袋里装上低温冰块，将细胞迅速转移到塑料里，将整个塑料袋放到低温冰箱内。 转化：1．新鲜制备的或‐20℃下保存的100mL 感受态细胞，置于冰上，完全解冰后轻轻地将细胞均匀悬浮。 2．加入5mL pUC19 质粒，DNA 浓度为10pg/mL，...
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