这里为您介绍二代测序的相关流程和应用。 随着人类基因组工程的完成，对于低花费的测序技术的需求促进了高通量二代测序技术的发展。这些新的测序平台允许进行高通量测序，具有广泛的应用： • 全基因组从头测序或者重测序 • 目标序列重测序 • 转录组分析 • 微生物组研究 • 基因调控研究 NGS 序列 二代测序仪器有很多种组合，在通量、片段长度、准确度、每一轮测序成本、每百万碱基对测序成本、初始成本、规格和技术方面存在存在差异。 从规格和初始成本的角度而言，二代测序仪器可轻松地分类为更窄的范围，也就是所谓的“台式测序仪”和高通量仪器。 台式测序仪使得任何实验室都可以像使用real-time PCR 一样，自己进行测序。这些仪器可以和一些靶标序列富集技术相结合，用在一些临床的应用中，其中：选定的靶标基因用于深度分析，以检测稀有的突变，或者检测多样样本中（比如癌症样本）中的突变。目前，这些仪器的通量在10 Mb 到 7.5 Gb 之间，但是随着硬件，软件和试剂的持续改善，通量也在稳步增加。 高通量测序仪非常适合于大量的，基因组范围的研究，每次测序能测定 600 Gb 的序列。一些这样的高通量和高精度的平台，能测定的片段长度相对较短，这对于高重复性的序列和未知基因组的从头测序就可能成为问题。与此相反，也有一些仪器能测序的片段较长（达到2500 bp），但是其精度和测序能力（90 Mb）要低很多。还有一些测序能力位于两者之间的仪器（~ 800 bp，700 Mb）。 因此，应用决定了哪一种仪器是最合适的。 有一种新的方法被称作“纳米孔测序”。这种技术中，根据一个 DNA 链通过一个合成的或者蛋白纳米孔道所引起的电流的改变，可以确定通过这个孔道的碱基。这理论上可以仅用一步就测序一个完整的染色体，而不需要生成新的DNA 链。 DNA 测序 二代DNA 测序的工作流程如下： • DNA 样本制备 • 文库构建和验证 • 文库分子大规模平行克隆扩增 • 测序 二代测序DNA 样本的质量控制 首先，评价基因组DNA 的质量是非常必要的（完整性和纯度）。 凝胶电泳法 基因组DNA 的完整性和大小，可以用常规或者脉冲场琼脂糖凝胶电泳(PFGE)来检测。常规的凝胶电泳的精确度不高，这是因为大的DNA分子在凝胶中移动的时候，本质上是用一种与尺寸无关的方式一起移动的。但是，它仍然能够提供完整性（大小范围）和纯度（RNA 污染物在凝胶底部形成脱尾条带）方面的有效信息。因此，它仍然是评...
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