实验六报告：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量 1.研究背景及目的 根据自然界中普遍存在的电泳现象，以及实践应用的需求，科学家不断完善了电泳技术，从移界电泳法、垂直管型盘状电泳、垂直板型电泳、垂直柱型盘状电泳到水平板型电泳。电泳技术广泛地应用于样品的分析鉴定。 蛋白质分子量的测定在理论和实践中具有很重要的意义，比如临床中对于尿液中蛋白质分子量的测定可以监测人体内的某些疾病（肾小管损坏、多发性骨髓瘤等）。这种需要促进了相关技术的发明。具体过程见原理。 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小 和形状等因素。从活性电泳到变性电泳经过了很多思考。从活性如果加入一种试剂使电荷因素及分子的形状消除 ，那 电泳迁移率就 取决于分子的大小，就 可以用电泳技术测定蛋白质的分子量。1967 年 ，Shapiro 等发现阴 离 子去 污 剂十 二 烷 基 硫 酸 钠 （SDS）具有这种作用[1]。通 过向 样品中添 加入巯 基 乙 醇 和过量SDS，使蛋白质变性解 聚，并 让 SDS 与 蛋白质结 合 成带强 负 电荷的复 合 物 ，掩 盖 了蛋白质之 间 原有电荷的差 异 。SDS 与 蛋白质分子结 合 ，不仅 使蛋白质分子带上 大量的负 电荷，而 且 使蛋白质分子的形状都 变成 短 棒 状，从而 消除 了蛋白质分子之 间原有的电荷差 异 和分子形状的差 异 。因此 蛋白质在SDS-PAGE 中的时迁移率主 要取决于其 分子大小。由 于 SDS 与 蛋白质的结 合 ，电泳迁移率在外 界条 件 固 定的情 况 下 ，只 取决于蛋白质分子量大小这一因素，使得SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳具有分辨 率高 、重复 性好 等特 性，因此广泛应用于未 知 蛋白质分子量测定。 通 过本 次 实验，学习 和掌 握 垂直板型聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理和方 法，进一步 学习和应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量。 2.原理 由 于技术的发展 ，理论上 可以通 过测序 测出 蛋白质分子量的真 值 ，但 是 实际 操 作 过于繁 琐 ，且 生 物 大分子的数 量级 是KDa，实际 中往 往 不需要特 别 精 确 。所以转 向 寻 求其 它方 法，如果两 种性质具有相关性，就 会 有相关理论基 础 和技术，发现分子量与 迁移速 率有关，于是 寻 找 相关方 面的技术。通 过沉 降 平衡 法测定分子量，但 是 需...
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