SDS-PAGE 1、 SDS-PAGE:聚丙烯酰胺凝胶电泳 2、 Acr:丙烯酰胺;配胶时用 30%Acr(质量比 Acr:Bis=29:1) 3、 Bis:甲叉双丙烯酰胺 4、 DDW:超轻水 5、 SDS:十二烷基硫酸/磺酸钠,阴离子去污剂(配胶时用 10%) 6、 APS:过硫酸铵 NH4S2O4 配胶时用 10% 7、 TEMED:四甲基乙二胺,促凝剂 8、 Tris-Hcl:3 羟基氨基甲烷盐酸缓冲液,配胶时(分离胶 ph=8.8,浓缩胶 ph=6.8) 9、 DTT:二硫苏糖醇,DTT 也常常被用于蛋白质中二硫键的还原,可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。 10、 IMA:碘乙酰胺,碘代乙酰胺用于有机合成,在蛋白组学中组氨酸和半胱氨酸的烷基化试剂,用于多肽测序以及酶抑制剂等,蛋白组学级试剂。 CH>2ICONH>2,是和碘乙酸一样,可通过下列反应不可逆地抑制 SH 酶类的物质。 1) 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,再按照下面的表格配制 SDS-PAGE 的分离胶(即下层胶): SDS-PAGE 分离胶浓度 最佳分离范围 6%胶 50-150kD 8%胶 30-90kD 10%胶 20-80kD 12%胶 12-60kD 15%胶 10-40kD 成分 配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积(毫升) 6%胶 5 10 15 20 30 50 蒸馏水 2.0 4.0 6.0 8.0 12.0 20.0 30%Acr-Bis(29:1) 1.0 2.0 3.0 4.0 6.0 10.0 1M Tris,pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0 10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5 TEMED 0.004 0.008 0.012 0.016 0.024 0.04 成分 配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积(毫升) 8%胶 5 10 15 20 30 50 蒸馏水 1.7 3.3 5.0 6.7 10.0 16.7 30%Acr-Bis(29:1) 1.3 2.7 4.0 5.3 8.0 13.3 1M Tris,pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0 10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5 TEMED 0.003 0.006 0.009 0.012 0.018 0.03 成分 配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积(毫升) 10%胶 5 10 15 20 30 50 蒸馏水 1.3 2.7 4.0 5.3 8.0 13.3 30%Acr-Bis(29:1) 1.7 3.3 5.0 6.7 10.0 16.7 1M Tris,pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0 10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0...