1 第四章 单克隆抗体与基因工程抗体的制备 第一节 杂交瘤技术的基本原理 第二节 单克隆抗体的制备 第三节 基因工程抗体制备 第四节 单克隆抗体的应用 将单个B细胞分离出来加以增殖形成一个克隆群落，该B细胞克隆产生出针对单一表位、结构相同、功能均一的抗体，称为单克隆抗体。 第一节 杂交瘤技术的基本原理 杂交瘤技术的原理是使免疫的小鼠脾细胞与具有体外长期繁殖能力的小鼠骨髓瘤细胞融为一体，成为杂交瘤细胞，最终获得既能产生所需单克隆抗体，又能长期繁殖的杂交瘤细胞系。 将这种杂交瘤细胞扩大培养，接种于小鼠腹腔，在小鼠腹腔积液中即可得到高效价的单克隆抗体。 一、杂交瘤技术 包括两种亲本细胞的选择与制备，细胞融合，杂交瘤细胞的筛选与克隆化。 （一）小鼠骨髓瘤细胞 细胞株稳定，易于传代培养。 细胞株自身不会产生免疫球蛋白或细胞因子。 该细胞是次黄嘌呤磷酸核酸核糖转化酶（HGPRT）的缺陷株。 （二）免疫脾细胞 免疫用抗原尽量提高其纯度和活性，免疫途径多 用腹腔内 或皮 内 多 点 注 射 法 。 如 为珍 贵 微 量抗原，可用脾脏 内 直 接注 射 法 进 行 免疫。 （三）细胞融合 PEG（聚 乙 二醇 ）可能导 致 细胞膜 上 脂 类 物 质 的物 理结构重 排 ，使细胞膜 容 易打 开 而 有助 于细胞融合。 （四）杂交瘤细胞的选择性培养 HAT培养液，是在基础 细胞培养液内 添 加次黄嘌呤、甲 氨 蝶 呤和胸 腺 嘧 啶 核苷 。 1.脾细胞（指 B细胞） 在一般 培养基中不能生长繁殖。 2.骨髓瘤细胞 因缺乏 HGPRT而 合成DNA，骨髓瘤细胞在 HAT培养基中不能增殖而 死 亡 。 3.杂交瘤细胞 由 骨髓瘤细胞和脾细胞融合形成的杂交瘤细胞。 由 于与脾细胞融合，可获得其HGPRT，可以合成DNA。因此 ，杂交瘤细胞在选择性培养得以生存 而 被 筛选出来。 二、阳 性杂交瘤细胞的克隆化培养 单个细胞培养又称克隆化。 细胞克隆化有以下 几 种方 法 ： 1.有限 稀 释 法 ； 2.显 微 操 作 法 ； 3.荧 光 激 活细胞分选仪 ； 主 管 检 验 师 临 床 医 学 检 验 免 疫 学 和 免 疫 检 验 第 四 章 单 克 隆 抗 体 与 基 因 工 程 抗 体 的 制 备 --第 1页主 管 检 验 师 临 床 医 学 检 验 免 疫 学 和 免 疫 检 验 第 四 章 单 克 隆 抗 体 与 基 因...
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