高效液相色谱分析原理 2009 年05 月12 日 星期二 17:46 高效液相色谱以经典的液相色谱为基础，是以高压下的液体为流动相的色谱过程。通常所说的柱层析、薄层层析或纸层析就是经典的液相色谱。所用的固定相为大于１００ｕｍ 的吸附剂（ 硅胶、氧化铝等）。这种传统的液相色谱所用的固定相粒度大，传质扩散慢，因而柱效低，分离能力差，只能进行简单混合物的分离。而高效液相所用的固定相粒度小（５ｕｍ-１０ｕｍ）、传质快、柱效高。 高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）是２０世纪６０年代后期发展起来的一种分析方法。近年来，在保健食品功效成分、营养强化剂、维生素类、蛋白质的分离测定等应用广泛。世界上约有８０％的有机化合物可以用ＨＰＬＣ来分析测定。 高效液相色谱分析原理 （一）高效液相色谱分析的流程 由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检 测器，检 测信 号 由数 据 处 理设 备 采 集 与处 理，并记 录 色谱图 。废 液流入废 液瓶。遇 到 复 杂 的混合物分离（极 性 范 围 比 较 宽 ）还 可用梯 度控 制 器作 梯度洗 脱 。这和 气 相色谱的程序 升 温 类似 ，不 同 的是气 相色谱改 变 温 度， 而ＨＰＬＣ改 变 的是流动相极 性 ，使 样品各 组 分在最 佳 条 件 下得 以分离。 （二）高效液相色谱的分离过程 同其他色谱过程一样，ＨＰＬＣ也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。 开始样品加在柱头上，假设样品中含有３个组分，Ａ、Ｂ和Ｃ，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。分配系数小的组分Ａ不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。分配系数大的组分Ｃ 在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。组分Ｂ的分配系数介于Ａ，Ｃ之间，第二个流出色谱柱。若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。 不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的...
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