缓冲液流动相可以根据下面的操作步骤配制： 1 将缓冲液药品溶解在水中制成缓冲液（溶液 A）。 2 用 pH 计确定或调节溶液 A 的 pH。 3 将一定体积（如 200ml）的有机溶剂 B 与由步骤 2 配制的溶液 A（如 800ml）混合，制成最终流动相（此处的有机相为 20%）。 4 检查最终流动相的 pH（此处为选项）。 由于测定含有有机调节剂的流动相 pH 计发生漂移，使其测定 pH 不很可靠，所以上面的步骤 4 一般只有在考察误差的主要来源时采用，大多数实验室皆略去此步骤。 步骤 1 一般是将配制缓冲液所用的两种试剂（A1 和 A2）分别按计算量先溶解在水中制成水溶液，然后再将这两种溶液按一定的比例混合得到预期 pH 的溶液 A。若在此步骤 2 中调节 pH，则可以采用溶剂 A滴定溶剂 B，也可反过来滴定，并通过 pH 计测量得到所需 pH 的最终缓冲溶液。在大多数实验室中，pH 的测量精度通常不会达到±0.05—0.1 个pH 单位，这会显著影响一些样品的分离。当HPLC 方法对pH 非常敏感时，步骤 2 只能大致确定 pH 值。 将准确称重的缓冲液配制试剂与精确体积的脱气蒸馏水混合，使其成为均一的溶液（不进一步调整pH），如此配得缓冲溶液的 pH 可以控制在非常窄得范围内（±0.02 单位），已知准确 pH 值的缓冲液浓溶液已有市售。 为了改善峰形或塔板数，有时在流动相中加入酸或碱（如三乙胺、乙酸等），如果这些添加剂并非为配制缓冲溶液时所采用得试剂，那么将这些试剂加入到流动相中后，还需重新滴加酸或碱，使流动相达到所需的 pH 值。 常用缓冲液的配制 当缓冲液被稀释或浓缩时，pH 也应不变。其 pH 值应近似恒定不变，或当其中的离解的阳离子（K+、Na+）或阴离子（Cl-、Br-）被其它种类的离子替换时。 表 1—4 中给出了响应的配制方法，平衡阳离子为 Na+，缓冲液的最终浓度为 0.1mol/l，对于其它浓度的缓冲溶液或阳离子种类（通常 K+）更好，表中的数据也可供参考。较稀的或较浓的缓冲溶液，及包含有不同阳离子的溶液，其 pH 值会与表中的数据稍有出入。在方法建立过程中，精确的流动相 pH 值往往并不重要，重要的是每次新配制的流动相的 pH 值与第一次基本相同（最好控制在± 0.02 范围内）。注意，只有当缓冲溶液的 pH 在缓冲试剂解离常数 pKIa± 1 范围内时，缓冲溶液才具有有效的缓冲容量（如乙酸盐的 pKa=4.6，其适宜的 pH 范围为 3.6—5.6）。 表 1 低pH 值（...
VIP
