几种菌种的保存及复苏方法（含扩增方法） 定期移植法，亦称传代培养保藏法，包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。是指将菌种接种于适宜的培养基中，最适条件下培养，待生长充分后，于4～6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。 操作步骤如下： 1 培养基制备 1.1 器皿准备 培养基制备过程中所用的一些玻璃器皿，如三角瓶、试管、培养皿、烧杯、吸管等，经洗涤、干燥、包装、灭菌后使用。 1.2 溶解培养基配料 先在烧杯中放适量水，按培养基配方称取各项材料，依次将缓冲化合物、主要元素、微量元素、维生素等材料加入水中溶解，最后加足水量，搅拌均匀。 1.3 调pH 值 配料溶解后将培养基冷却至室温，根据要求加稀酸（0.1mol/L 盐酸）或稀碱(10%氢氧化钠)调pH 值。加酸或碱液时要缓慢、少量、多次搅拌，防止局部过碱或过酸而 导 致 测 量不 准确 和 营 养成 分被 破 坏 。 1.4 加凝 固 剂 配制固 体培养基时需 加凝 固 剂 ，如琼 脂 、明 胶 等。将凝 固 剂 加入液体培养基中，加热 并不 断 搅拌至融解，再 补 足所蒸 发 水分。 1.5 过滤 分装 在二 层 纱 布 中间夹 入脱 脂 棉 ，将配好 的培养基趁 热 过滤 并分装。斜面培养基分装量约 为 试管高 度 的四分之 一(4～5mL)，穿刺培养基分装量以 试管高 度 的二 分之 一为 宜。分装过程中勿 使培养基沾 污 管口 ，以 免弄 湿 棉 塞 造 成 污 染 。 1.6 包扎 标 记 将试管加棉 塞 ，外 面包扎 一层 牛 皮 纸 或铝 箔 并注 明 培养基名 称及配制日 期。 1.7 灭菌 根据要求将培养基灭菌，通 常 蒸 汽 灭菌为121℃，15～20min。 1.8 斜面摆 放 灭菌后及时摆 放斜面，斜面长度 不 超 过试管管长的二 分之 一为 宜。 1.9 无 菌检 查 将灭菌的培养基放入培养箱 中作无 菌检 验 ，通 常30℃培养1～3 天 。无 菌检 查 合格 后将其 保存于4℃下备用。 2 接种 2.1 斜面接种 2.1.1 点 接 把 菌种点 接在斜面中部偏 下方处 。适用于扩散 型 生长及绒 毛 状 气 生菌丝 类 霉 菌（如毛 霉 、根霉 等）。 2.1.2 中央 划 线 从 斜面中央 自 下而 上 划 一直 线 。适用于细 菌和 酵 母 菌等。 2.1.3 稀波 状 蜿 蜒 划 线 法 从 斜面底 部自 下而 上 划 “之 ”字 形 线 。适用于易 ...
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