第 四 章 目 的 基 因 的 分 离 克 隆 一 般 认 为 基 因 克 隆 ， 主 要 包 括 以 下 几 个 过 程 ： ① DNA 片 段 的 分 离 、 纯 化 ， 即 目 的 基 因 的 制 备 ； ② 外 源DNA 片 段 与 载 体 DNA 分 子 的 体 外 连 接 ； ⑧ 人 工 构 建 的 重 组 体 向 寄 主 细 胞 内 的 转 移 ； ④ 重 组 克 隆 的 筛 选 和 鉴定 。 第 一 节 化 学 法 合 成 目 的 基 因 这 种 方 法 主 要 适 用 于 已 知 核 苷 酸 序 列 的 、 分 子 量 较 小 的 目 的 基 因 的 制 备 。 随 着 蛋 白 质 和 DNA 序 列 测 定技 术 的 发 展 ， 越 来 越 多 的 基 因 结 构 已 被 测 定 出 来 ， 重 组 DNA 技 术 的 发 展 也 有 力 地 推 动 了 基 因 化 学 合 成 的 研究 ， 特 别 是 各 种 DNA 自 动 合 成 仪 的 问 世 ， 大 大 地 改 变 了 化 学 合 成 基 因 的 面 貌 ； 从 最 初只能人 工 合 成 15bp 的寡核 苷 酸 片 段 ， 到目 前可以 利用 自 动 合 成 程 序 合 成 长达200bp 的 寡核 苷 酸 片 段 。 利用 DNA 连 接 酶的 作用 ，甚至可以 合 成 和 组 装更长的 基 因 片 段 。 到目 前为 止， 已 经成 功地 合 成 了 数十种 基 因 。 目 前基 因 合 成 更多 的是 由DNA 自 动 合 成 仪 来 完成 . 第 二节 PCR 技 术 在基 因 克 隆 中的 应用 聚合 酶链式反应(polymerase chain reaction， PCR)是 利用 单链寡核 苷 酸 引物对特 异DNA 片 段 进行体外 快速扩增的 一 种 方 法 。 该反应是 一 指数式反应， 其可在短时间内 使目 的 片 段 的 扩增量 达到106 倍， 可从极微量 的 DNA 乃至单细 胞 含有 的 DNA 起始， 扩增出 ug 级的 PCR 产物。 自 20 世 纪80 年代中期PCR 技 术 问 世以 来 ， 迅速渗透到了 分 子 生物学 的 各 个 领域， 现已 在基 因 克 隆 、 外 源 基 因 的 整合 检测 、 物种 起源 、 生物进化 等方 面 得到了 广泛应用 。 本节 将对PCR 的 基 本技 术 及在基 因 分 离 克 隆 中常用 ...
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