军事医学科学院（博士）微生物 2002 年微生物1、毒力岛：毒力岛具有以下特点：1. 编码细菌毒力基因簇的一个相对分子质量较大的(20～100kb 左右)染色体 DNA 片段；2.一些毒力岛的两侧具有重复序列和插入元件， 但是也可以没有；3.毒力岛往往位于细菌染色体的 tRNA 基因位点内或附近， 或者位于与噬菌体整合有关的位点，肠致病性大肠杆菌(EPEC)的 LEE 毒力岛就位于 tRNA selC 位点；4.毒力岛 DNA 片段的 G+C mol % 、密码使用和宿主细菌染色体有明显差异， 有的比宿主细胞的G+C mol% 明显高， 有的 明显低； 5.毒力岛编码的基因产物许多是分泌性蛋白和细胞表面蛋白， 如溶血素、菌毛和血红素结合因子， 一些毒力岛编码细菌的分泌系统（如Ⅲ型分泌系统）、信息传导系统和调节系统； 6. 一种病原菌可以有一个或几个毒力岛； 7. 一部分学者认为， 细菌的毒力岛应该包括位于噬菌体和质粒上的、与细菌的毒力有关的、其G+C 百分比和密码使用与宿主细胞明显不同的 DNA 片段；8.毒力岛可能与新发现的病原性细菌有关。2、定点诱变技术：是在体外特异性地取代、插入或缺失 DNA 序列中任何一个特定碱基的技术，包括盒式取代诱变、寡核苷酸引物诱变及 PCR 定点诱变等。3、DNA 微点阵芯片：寡核苷酸芯片的主要原理与 cDNA 芯片类似，主要通过碱基互补配对原则进行杂交，来检测对应片段是否存在、存在量的多少。它与 cDNA 芯片的本质差别在于寡聚核苷酸芯片固定的探针为特定的 DNA 寡聚核苷酸片段（探针），而后者为cDNA。基因表达芯片的两个重要参数是检测的灵敏度和特异性。cDNA 芯片由于基因长短不同以至 Tm 值各异，众多的基因在同一张芯片上杂交，使得杂交条件很难同一，使得传统的 cDNA 芯片的分辨能力受到限制。寡聚核苷酸芯片序列选择经过优化，利用合成的一定长度（如 20，30，70-mer 等）的寡核苷酸单链探针代替全长 cDNA 点样，制成芯片。其优点：无需扩增，防止扩增失败影响实验；减少非特异杂交，能有效区分有同源序列的基因；杂交温度均一，提高杂交效率；减少二级结构。此外，寡核苷酸芯片还可以通过原位合成法制备，而 cDNA 芯片只能通过后者制备。上述特点使得寡核苷酸芯片的应用日益广泛。但是当寡核苷酸序列较短时，单一的序列不足以代表整个基因，需要用多段序列。 高密度的寡核苷酸芯片作为一个有力的工具广泛用于分析基因组数据，与传统的凝胶分析方法比较起来，具有成本低、高...
VIP
