《基因工程》、《细胞工程》《基因工程》、《细胞工程》疑难解析生物组李庆伟PCR技术•多聚酶链式反应，一种体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法。•原理：DNA双链复制DNADNA复制的条件复制的条件：模板DNA、脱氧核苷酸、解旋酶、DNA聚合酶ATP供能DNA复制需要引物DNADNA复制的条件复制的条件：模板DNA、脱氧核苷酸、解旋酶、DNA聚合酶ATP供能DNA复制需要引物DNA复制(子链延伸)的方向：从5’3’引物引物5’5’5’5’3’3’3’3’5’5’5’5’3’3’DNADNA聚合酶聚合酶PCR反应体系•模板——目的基因•引物——人工设计并合成的单链DNA•酶——热稳定DNA聚合酶（Taq酶）•原料——dNTP•缓冲液——pH、Mg2+PCR循环过程•预变性（90-95℃℃）2min•变性（90-95℃℃）30s•退火（55-60℃℃）15s•延伸（70-75℃℃）1min•反应30个循环目的基因2n-2n目的基因的检测——目的基因的检测——标记基因or探针检测分子杂交•探针—被放射性同位素标记目的基因片段•基因组DNA适当的限制酶切割琼脂糖凝胶电泳转膜变性杂交洗膜检测分子杂交•探针——目的基因的一段•基因组DNA适当的限制酶切割琼脂糖凝胶电泳转膜变性杂交洗膜检测转膜变性杂交洗膜检测重组质粒是不是只有整合到染色体DNA上才能完成表达？离体的植物器官、组织或细胞脱分化愈伤组织再分化芽、根发育植物体胚状体丛芽与胚状体愈伤组织的颜色关于愈伤组织再分化，先“生芽”再“生根”关于动物细胞的传代培养——单克隆抗体的两次筛选一、筛选杂交瘤细胞——HAT培养液核苷酸合成途径从头合成——D途径补救合成——S途径筛选原理•B淋巴细胞D途径被阻断，S途径正常无体外增殖的能力未融合的B淋巴细胞和B-B融合的细胞被淘汰。•骨髓瘤细胞D途径被阻断，自身缺陷型，无S途径未融合的瘤细胞和瘤-瘤融合的细胞被淘汰只有杂交瘤细胞才能存活单克隆抗体的两次筛选二、筛选产生特异性抗体的杂交瘤细胞——“有限稀释法”抗体检测
