第26章基因诊断与基因治疗人民卫生出版社PEOPLE'SMEDICALPUBLISHINGHOUSE目录第一节基因诊断第二节基因治疗人民卫生出版社PSOFLE'SMEDICALFIIBUSHINGHOUSE命令教师重点难点掌握基因诊断与基因治疗的概念熟悉基因诊断技术、基因治疗的基本策略和基本程序了解基因诊断和基因治疗在医学中的应用人民卫生出版社PSOFLE'SNEDICALFIIBUSHINGHOUSE第1节基因诊断人民卫生出版社PEOPLE'SMEDICALPUBLISHINGHOUSE命合教育一、基因诊断的概念与特点(1)基因诊断的概念：是指利用分子生物学技术和方法直接检测基因结构及其表达水平是否正常，从而对疾病作出诊断的方法。(2)基因诊断的特点：(1)基因诊断的特异性强(2)基因诊断的灵敏度高强(3)基因诊断可进行快速和早期判断(4)基因诊断适用性强、诊断范围广人民卫生出版社PSOFLE'SMEDICALFIBUSHINGHOUSE命合教材二、基因诊断的对象及样品来源(1)基因诊断的对象主要是DNA分子，涉及到功能分析时，还可定量检测RNA(主要是mRNA)和蛋白质等分子。(2)基因诊断的样品来源：临床上可用于基因诊断的样品有血液、组织块、羊水和绒毛、精液、毛发、唾液和尿液等。人民卫生出版社PSOPLE'SNEDICALFIBUSHINGHOUSE命合教材三、基因诊断的基本技术(一)核酸分子杂交技术1.Southern印迹法其可以区分正常和突变样品的基因型，并可获得基因缺失或插入片段大小等信息。DNA印迹一般可以显示50bp~20kbp的DNA片段，片段大小的信息是该技术诊断基因缺陷的重要依据。2.Northern印迹法Northern印迹法(Northernblot)能够对组织或细胞的总RNA或mRNA进行定性或定量分析，及基因表达分析。Northern印迹杂交对样品RNA纯度要求非常高，限制了该技术在临床诊断中的应用。人民卫生出版社PSOFLE'SMEDIOALFIBUSHINGHOUSE命合教育三、基因诊断的基本技术(一)核酸分子杂交技术3.斑点杂交(dotblothybridization)是核酸探针与支持物上的DNA或RNA样品杂交，以检测样品中是否存在特异的基因或表达产物，该技术可用于基因组中特定基因及其表达产物的定性与定量分析。4.原位杂交(insituhybridization,ISH)是细胞生物技术与核酸杂交技术相结合的一种核酸分析方法，核酸探针与细胞标本或组织标本中核酸杂交，可对特定核酸序列进行定量和定位分析。人民卫生出版社PSOPLE'SMEDIOALPIBUSHINGHOUSE命合教育三、基因诊断的基本技术(一)核酸分子杂交技术5.荧光原位杂交(Fluorescenceinsituhybridization,FISH)是将荧光素或生物素等标记的寡聚核苷酸探针与细胞或组织变性的核酸杂交，可对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。在基因诊断中，FISH的优势在于对任何给定的基因组区域进行特异性杂交，对中期分裂象染色体及间期细胞核进行分析，可以获得传统显带技术所无法检测到的染色体信息。人民卫生出版社命合教材三、基因诊断的基本技术(二)PCR技术1.直接采用PCR技术进行基因诊断裂[因其简便灵敏而更适用于临床诊断。该方法的思路是：设计并合成一组序列上跨越突变(缺失或插入)断裂点的引物，将待测DNA样本进行PCR扩增，然后进行琼脂糖凝胶电泳，从扩增片段的大小直接判断是否存在缺失或插入突变。多重PCR是一种实用可靠的检测DNA缺失的常用方法，其基本原理是在一次PCR反应中加入多种引物，对一份DNA样本中的不同系列片段进行扩增，每对引物扩增的产物长度不一。可以根据电泳图谱上不同长度DNA片段存在与否，判断某些基因片段是否发生缺失或突变。人民卫生出版社PEOPLE'SMEDIOALPIBUSHNGHOUSE命令教材二、基因诊断技术(二)PCR技术GCCCTGTGGGGCAAGGTGAACGTGGA正常2.PCR-等位基因特异性寡核苷酸分子杂交CGGGACACCCCGTTCCACTTGCACCT基因组DNAGCCCTGTGGGGCTAGGTGAACGTGGA检测点突变的有效技突变CGGGACACCCCGATCCACTTGCACCT术是等位基因特异性寡核苷酸(allelespecificGTGGGGCAAGGTGAACGTGGGGCTAGGTGAAColigonucleotide,ASO)正常探针分子杂交突变探针12CBA人民卫生出版社PSOPLE'SMEDICALFIBUSHINGHOUSE命合教育三、基因诊断的基本技术(二)PCR技术3.PCR-限制性片段长度多态性是将PCR于限制性片段长度多态性(restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP)结合起来的技术，可以快速、简便地对已知突变进行基因诊断...
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