第40课时微生物的分离和培养考点125——生物技术手段微生物实验室培养1．培养基的类型及作用划分标准培养基种类特点用途物理性质液体培养基不加凝固剂工业生产半固体培养基加凝固剂，如琼脂观察微生物的运动、分类鉴定固体培养基微生物的分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种化学成分天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成)分类、鉴别用途选择培养基允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长培养、分离出特定微生物，如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度食盐鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品—鉴别不同种类的微生物，如用伊红美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽)2.培养基的配制原则和营养构成(2)培养基的营养构成①各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。②不同培养基还要满足不同微生物对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。3．配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项(1)步骤：计算―→称量―→溶化―→灭菌―→倒平板(2)注意事项①倒平板的温度一般在50℃左右适宜，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。②平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。4．纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项(1)原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。(2)方法：平板划线法、稀释涂布平板法。①平板划线法：平板划线法中细菌的分离和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的移动划线过程中。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单个菌落。(如下图)注意a．划线时最后一区域不要与第一区域相连。b．划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。②稀释涂布平板法Ⅰ.系列稀释操作(图1)a．将分别盛有9mL水的6支试管灭菌，并按101～106的顺序编号。b．用移液管吸取1mL培养的菌液，注入101倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸3次，使菌液与水充分混匀。c．从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复b步混匀操作。以此类推，直到完成最后1支试管的稀释。图1注意移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管应在离火焰1～2cm处。Ⅱ.涂布平板操作如图2所示：图2“”注意稀释涂布平板操作复杂，各个细节均应保证无菌。具体如下：①酒精灯与培养皿的距离要合适；②吸管头不要接触任何其他物体；③吸管要在酒精灯火焰周围使用。1．自养微生物和异养微生物的营养比较营养类型碳源氮源生长因子自养微生物CO2、NaHCO3等含碳无机物NH3、铵盐、硝酸盐等一般不需要异养微生物糖类、脂肪酸等铵盐、硝酸盐、蛋白质等有些微生物需要2.划分依据：自养微生物与异养微生物类型划分的主要依据是能否以无机碳作为生长的主要或唯一碳源，而与氮源无关。自养微生物以CO2或碳酸盐为主要或唯一碳源进行代谢生长；异养微生物必须以有机物作为碳源进行代谢生长。3．自养微生物的能源(1)利用光能，如蓝藻等。(2)依靠物质氧化过程中释放的能量，如硝化细菌，能利用NH3氧化过程中释放的化学能，NH3既作为氮源，又作为能源。4．异养微生物的能源主要来源于有机物的氧化分解，碳源不仅为异养微生物提供构成细胞的物质，而且提供完成整个生命活动所需的能量。1．(·新课标全国卷，39)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以________为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于__________培养基。(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即________________和________________。(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力__________。(4)通常情况下，在微生物培养过程中...
