细菌内毒素检测方法验证方案目的范围责任人内容1.-------------------------------------------------------------------实验材料及用具2.-------------------------------------------------------------------具体验证步骤2.1.鲎试剂灵敏度复核2.2..干扰实验2.3.----------------------------------------------------------------------------------------------------供试品细菌内毒素检查3.验证结论附：表1.鲎试剂灵敏度复核记录表2.干扰试验预实验表3.干扰试验记录表4.细菌内毒素检查记录细菌内毒素检测方法验证方案目的：为确保注射用重组抗Her2单克隆抗体细菌内毒素检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求，特制定此方案。范围：注射用重组抗Her2单克隆抗体细菌内毒素检测方法责任人：细菌内毒素检验员、QC主管内容：1.实验用具及试剂1.1实验用具内毒素试管恒温仪、旋涡混合器、可调式移液枪、试管架、时钟、75%酒精棉。1.2实验试剂试剂名称来源产品批号细菌内毒素工作标准品80EU/支中国食品药品检定研究院150601-201886细菌内毒素检查用水（5mL）湛江安度斯生物有限公司1811090无热源空安瓿（2mL）湛江安度斯生物有限公司1809040鲎试剂(0.125EU/mL)湛江安度斯生物有限公司18072722•具体验证步骤2.1.鲎试剂灵敏度复核2.1.1.实验操作2.1.1.1.细菌内毒素标准溶液的制备加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解其内容物，封口膜封严后置旋涡混合器混合15分钟。检查用水稀释制备4个浓度的细菌内毒素标准溶液，即2入、入、0.5入、0.25入。2.1.1.2.待复核鲎试剂的准备取入=0.125EU/mL的鲎试剂18支后启备用。每支加入0.1ml检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。2.1.1.3.加样待复核鲎试剂18支放在试管架上，排成5列，其中4列4支，1列2支。4支4列每列每支分别加入0.1ml的2入、入、0.5入、和0.25入的内毒素标准溶液;另2支（管）加入0.1ml检查用水。加样结束后，封口膜封口，振动混匀后放入37°C±1°C恒温仪中，保温60±2分钟。2.1.1.4.观察并记录结果将试管架从水浴中轻轻取出，避免振动，将每管拿出缓缓倒转180°观察，管内形成凝胶，并且凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（+）；未形成凝胶或凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（－）2.1.2.实验结果计算如最大浓度2.0入4管均为阳性，最低浓度0.25入4管均为阴性，阴性对照为阴性时实验为有效，按下式计算反应终点浓度的几何平均值即为鲎试剂灵敏度的复核结果（入丿。入c=lg-1（刀X/4）式中x为反应终点浓度的对数值（lg）。反应终点浓度是系列递减的内毒素标准溶液中最后一个呈阳性结果的浓度。2.1.3.结果判断当入c在0.5入〜2入（包括0.5入和2入）时判定该批鲎试剂灵敏度复核合格，可用于干扰实验和供试品细菌内毒素检查，并以入（标示灵敏度）为该批鲎试剂的灵敏度。2.2.干扰实验2.2.1.操作方法2.2.1.1.目的是检验在某一浓度下的供试品对于鲎试剂与内毒素的反应有无干扰作用。使用的供试品溶液应为未检验出内毒素且不超过所使用的鲎试剂的最大有效稀释倍数的溶液。2.2.1.2.制备内毒素标准对照溶液取1支细菌内毒素标准品，用细菌内毒素检查用水稀释成4个浓度的标准溶液即2入、入、0.5入、0.25入。2.2.2.3.制备含内毒素的供试品溶液将供试品稀释至预实验中确定的不干扰稀释倍数，再用此稀释液将3.2.3.1.中的同支细菌内毒素标准品稀释成I个浓度即2入、入、0.5入、0.25入的含内毒素的供试品溶液。2.2.2.4.鲎试剂的准备取入=0.125EU/mL的鲎试剂18支后启备用。每支加入0.1ml检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。2.2.2.5.加样将准备好的鲎试剂取其中18支（管）放在试管架上，排成5列，4列4支（管），1列2支（管）。其中的4支4列每列每支分别加入0.1ml的2.0入、1.0入、0.5入、0.25入的内毒素标准溶液，另一列2支（管）加入0.1ml检查用水作为阴性对照。将另外18支（管）鲎试剂放在试管架上，排成5列，4列4支（管），1列2支（管）。其中的4支4列每列每支分别加入0.1ml的含2.0入、1.0入、0.5入、0.25入的内毒素的供试品溶液，另一列2支（管）加入0.1ml...
