脱细胞支架的胎儿细胞注射摘要：建立体外心肌细胞分离培养、纯化和鉴定方法。[方法]若干只小鼠分10次采用分离消化法培养心肌细胞,分别用A、B、C、D4组不同培养液培养,以Ficoll梯度液纯化,进行Desmin免疫组化鉴定。[结果]心肌细胞培养后经台盼蓝检查成活率达95%以上,在接种后4～5d增殖达高峰,A、B、C3组培养液对心肌细胞的培养效果无差异。Ficoll分离纯化的心肌细胞纯度较高,有97%的心肌细胞Desmin胞浆呈阳性反应。[结果]采用Ficoll纯化以国产血清培养,可获得高产量高纯度的心肌细胞。关键词：脱细胞；支架；胎儿细胞FromfetalcellswereinjectedAbstract:Toestablishapracticalmethodsoftheculture,purificationandidentificationofmousemyoblastsinvitro.Methods：Musclesamplesof40miceweremincedanddigestedwithtrypsin,cul2turedwithfourkindsofmedianamelyA,B,C,andD,finallypurifiedwithFicollgradientliquid.Myogenesisweredynamicallyobserved,myoblastweretestedbyDesminimmunohistochemistrystains.Result：Themy2oblastcellviabilityisupto95%byTrypanblue,thecellproliferationarrivedclimaxduring4～5dayafterplanted.ThereisnodifferencebetweenA,B,andCcultureliquid.Thecellpurityisupto97%byDesminim2munohistochemicalstainstest.Conclusion：MyoblastscouldbepurifiedbyFicollandculturedwithDMEMcul2tureliquidcontainedserummadeinourcountry,inhighquantity.Keywords:Takeoff，Stents，Fetalcells1引言目前全世界有2200万人感染了心脏衰竭。在同种异体移植中，已有肾、肝、心、肺、小肠、骨关节等移植成功的报道。但同种异体组织、器官仍有供者严重不足的困难。因此，寻找异种移植源成为现代移植外科研究的前沿。异种移植与同种异体移植一样，克服排斥反应将是今后研究的重点，但实质器官如心、肝、肾的异种移植一旦失败，则意味着患者丧失生命。心脏移植仍然是最终确定的治疗心脏衰竭阶段，但捐赠器官的供应是有限的。一旦心脏移植后，往往需要以交换高血压，糖尿病和肾衰竭为代价。目前能够有较完善的方法制取脱细胞的支架，而且现在已有报道美国研究者在实验室里诱导死亡老鼠心脏再次跳动，这个发现可能会在将来某一天为人类定制组织器官。首先是制作一个脱细胞的可以灌注的血管结构，冲洗存在死亡老鼠心脏的细胞同时使胶原蛋白基本结构保持不变。用新生老鼠的心脏细胞注射给这个像透明胶质，给予脱细胞支架丰富的营养并流他们在实验室里生长，四天后心脏开始收缩。如今发现的这个新方法，从理论上讲，猪心或人捐赠的心脏不再作移植可行的一天，可以去除其细胞，并通过上述过程，帮助需要新的心脏瓣膜或新的心脏的人们。2简单脱细胞支架的制备选取经液氮保存3个月的同种生物带瓣管道"包括同种带瓣主动脉管道和带瓣肺动脉管道作为实验材料!同种带瓣管道的制备和保存按我们常规方法制备。主要试剂：十二烷基硫酸钠；Tris缓冲液；D-Hank's；PBS液；乙二胺四乙酸；抑肽酶；青霉素液；链霉素液；制霉菌素；复合染色液；亮绿染色液。主要仪器：生物净化工作台；程控降温仪；孵育箱；扫描电子显微镜；普通光学显微镜。脱细胞的同种带瓣管道支架的制备：1、液氮保存的同种带瓣管道复苏。将其消毒后去除外层塑料袋，检查无破裂后，在40℃无菌生理盆水中快速解冻。在室温盆水中清洗10min，用于实验研究。2、将复苏的同种带瓣管道用D-Hank's液充分漂洗。该混合液中含有:抑肤酶(10KIU/ml)；青霉素(100U/ml)；链霉素(100ug/ml)；制霉菌素(100U/ml)；HEPES液(10mmol/L，pH7.6)。3、漂洗后的同种带瓣管道贮存于新鲜配制的PBS液中。PBS液中含有:EDTA(0.1%，W/V)；抑肽酶(10KIU/ml)；青霉素(100U/ml)；链霉素(100ug/ml)；制霉菌素(100U/ml)。4、用低渗Tris缓冲液溶解瓣膜细胞，室温下孵育18-24h。低渗Tris缓冲液的组成:Tris缓冲液(10mmol/L)；EDTA(0.1%，W/U）；抑肤酶(10KIU/ml)；青霉素(100U/ml)；链霉素(100ug/ml)；制霉菌素(100U/ml)。5、采用细胞洗涤剂来脱细胞，即将SDS加入低渗Tris、缓冲液中，室温下孵育24h。SDS的浓度为:质量浓度为0.03%SDS(W/V)用于脱瓣膜的细胞...
