课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段(时间：30分钟满分：50分)考查知识点及角度难度及题号基础中档稍难PCR原理及其与细胞内DNA复制的比较1、2、36PCR操作程序58PCR各轮反应特点47一、选择题(每小题4分，共20分)1．PCR技术扩增DNA，需要的条件是()。①目的基因②引物③四种脱氧核苷酸④DNA聚合酶等⑤mRNA⑥核糖体A．②③④⑤B．①②③⑥C．①②③④D．①③④⑤解析PCR技术需要目的基因作为扩增的模板，DNA聚合酶催化反应的进行，而引物是满足DNA聚合酶起作用的需要，四种脱氧核苷酸是该过程的原料。答案C2．下列有关PCR反应的叙述正确的是()。A．PCR反应所需要的引物只是RNAB．PCR反应所需要的材料是核糖核苷酸C．PCR反应所需要的酶在60℃会变性D．PCR反应需要在一定的缓冲溶液中进行解析PCR反应需要的引物是DNA或RNA，反应所需要的材料是脱氧核苷酸，PCR所需要的酶是耐高温的，在60℃不会变性。答案D3．下列各项属于引物作用的是()。A．打开DNA双链B．催化合成DNA子链C．使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始复制D．提供模板解析DNA分子的复制具有方向性，即只能从子链的5′→3′方向进行复制。当引物与DNA母链结合后，DNA聚合酶就能从引物的3′端开始延伸DNA链。所谓3′、5′是指脱氧核糖上C原子的位置。脱氧核糖的结构图如上图所示。答案C4．PCR一般要经过三十多次循环，从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链作模板时()。A．仍与引物Ⅰ结合进行DNA子链的延伸B．与引物Ⅱ结合进行DNA子链的延伸C．同时与引物Ⅰ和引物Ⅱ结合进行子链的延伸D．无需与引物结合，在酶的作用下从头合成子链解析考查同学们对PCR反应中的变性、复性、延伸的实质是否理解。当由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链作模板时，此单链引物固定端为5′端，因此与它互补的子链应从另一端开始合成，即与引物Ⅱ结合延伸DNA子链。答案B5．PCR仪实质上是一台自动调控温度的仪器，它调控不同温度的目的是()。①95℃，使DNA分子变性，失去生物活性②95℃，使DNA分子变性，解开螺旋③55℃，使DNA分子开始复制、延伸④55℃，使DNA分子恢复双螺旋结构，恢复活性⑤72℃，使DNA分子开始复制、延伸⑥72℃，使DNA分子恢复双螺旋结构，恢复活性A．①③⑤B．②③⑤C．②④⑤D．②④⑥解析PCR利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解旋与结合。PCR仪实质上是一台能够自动调控温度的仪器。当温度上升至95℃时，DNA分子变性，解开双螺旋结构；温度下降到50℃左右(55℃)，引物与DNA单链结合，DNA恢复双螺旋结构，恢复活性；温度上升至72℃，DNA分子开始复制、延伸，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。答案C二、非选择题(共30分)6．(14分)PCR技术有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行研究的问题，而被广泛应用，此过程需要一种TaqDNA聚合酶。(1)体内DNA复制过程中用解旋酶打开双链DNA，而PCR技术中应用________。(2)TaqDNA聚合酶是从水生耐热细菌Taq中分离的。①为什么Taq细菌能从热泉中被筛选出来呢？__________________________________________________________。②TaqDNA聚合酶的功能是______________________________________。③TaqDNA聚合酶的化学本质为蛋白质，可用________法和________法进行分离。④为了使TaqDNA聚合酶能够多次反复利用，可采用______技术，常用的方法为____________________________。(3)从土壤中分离分解尿素的细菌时，应采取的措施是________，原因是__________________________________________________________。(4)相对于细菌分离，DNA分子的分离和提取操作要复杂的多。①在DNA提取中两次用到蒸馏水，其目的分别是：________、________。②实验中能否以哺乳动物成熟的红细胞为实验材料？为什么？____________________________________________________________________________________________________________________。(5)与体内DNA复制相比较，PCR反应要在________中才能进行，并且要严格控制________条件。(6)PCR中加入的引物有________种，加入引物的作用是____________________。答案(1)高温使DNA分子热变性(2)①热泉70～80℃的高温条...
