硬叶兜兰居群水平的ITS基因扩增与信息分析摘要为优化兜兰ITS-PCR反应体系，以硬叶兜兰为试材，用改良的2×CTAB提取总的DNA，以10×PCRbuffer1ul、Mg2+1.25ul、dNTP1.2ul、引物0.25ul、Taq酶0.3ul、ddH2O3.45ul为基础，模板DNA为2ul(50ng/ul)，通过实验摸索PCR的最佳退火温度，优化反应体系，对硬叶兜兰进行核基因ITS间隔子扩增，通过0.8％琼脂糖凝胶电泳在Bio-Rad凝胶成像系统筛选可行反应产物。反应产物经测序分析，目的基因片段大小在793-809bp,通过NBCI网上在线对比分析证实为硬叶兜兰的ITS基因，该基因与同属植物的同源性为90%-99%。关键词：硬叶兜兰；ITS间隔子扩增；反应体系目录...........................................................................................................................2........................................................................................2................................................................................4........................................................................4............................................................6.........................................................................................7................................................................................................................9.............................................................................................9................................................................................................9..........................................10...............................................................10...........................................................................11.............................................................................11...................................................................................................11.............................................................................................................12......................................................................................12....................................................................................13..........................................................................................13...............................................................................13.....................................................................16.................................................................................................................21.....................................................................................................................22.............................................................................................................24.............................................................................................................................251前言1.1兜兰属植物的概况兜兰,也称“女士拖鞋兰”、“仙履兰”,是兰科（Orchidaceae）兜兰属(Paphiopedilum)植物的统称。在拉丁语中，兜兰属名Paphiopedilum由爱神Paphos和鞋Pedilon组成。世界上大约有66种兜兰属植物。近年来，已发现10多个新物种，总数超过80种[1]。兜兰属于亚热带植物，主要分布于东南亚至喜马拉雅低地至中国西南部，仅有少数物种分布在新几内亚和所罗门群岛。中国是兜兰属植物的主产区之一，有18种，主要生长在西南各省和地区，华南地区分布很少[2]。大多数种类的分布范围很窄，并具有一定的区域特征。例如杏黄兜兰（Paphiopedilumarmeniacum）、硬叶兜兰（P.micranthum）、麻栗坡兜兰（P.malipoense）仅分布在热带过渡区...
