高二生物学案课题：血红蛋白的提取和分离竹箦中学陆新华一、课题目标：1、通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法。2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。二、过程：（一）基础知识1、凝胶色谱法①凝胶色谱法的原理？②凝胶色谱法有哪些用途？③凝胶色谱法分离过程？2、缓冲液①缓冲液的组成、作用？②试说说人体血浆中的PH能够保持稳定与什么物质有关？3、电泳①蛋白质分子在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度与所带净电荷的多少以及分子大小的关系？如何消除电荷对蛋白质迁移速度的影响？②凝胶电泳法的原理？（二）实验操作1、蛋白质的提取和分离一般分为哪四步？2、洗涤红细胞的目的是什么？3、分离红细胞采用什么方法？4、血红蛋白和血浆蛋白哪种蛋白存在于内环境中？血红蛋白的作用？1高二生物学案5、血红蛋白的释放的原理？6、如何除去血红蛋白溶液中无机盐和小分子有机物质？该方法的采用的原理是什么？7、根据凝胶色谱柱的装填步骤，试完成下表步骤操作要求①操作要求②计算称量凝胶③配制悬浮液④装填悬浮液⑤缓冲液洗涤平衡例题分析：1、某同学在实验课前从学校的附近的屠宰场取新鲜的猪血，并在采血容器中预先加入抗凝血剂檬酸钠，取血回来马上进行实验，请回答红细胞洗涤的有关问题：（1）你如何知道红细胞已洗涤干净？（2）分离红细胞时的离心速率及离心时间分别是（3）如若离心速率过大和时间过长，则结果会怎样？2、红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带O2或CO2，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题：（1）实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。①加入柠檬酸钠的目的是②以上所述的过程即样品处理，它包括、、收集血红蛋白溶液。（2）通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS—聚丙烯酰胺凝胺电泳进行纯度鉴定。①样品纯化的目的是什么？②血红蛋白有什么特点？这一特点对进行蛋白质的分离有何意义？2高二生物学案巩固训练：一、单项选择题1、下列叙述不正确的是（）A、蛋白质所带的电荷数越多，移动得越快B、蛋白质所带的电荷数越少，移动得越快C、电荷数相同时，颗粒越大，移动越慢D、电何数相同时，颗粒越小，移动越快2、下列关于凝胶色谱法的原理及操作不正确的是（）A、是利用凝胶把分子大小不同的物质分离开的一种方法B、在洗脱过程中，大分子不能进入凝胶内部而最先流出，而小分子可以进入凝胶内部而流速缓慢，最后流出C、凝胶内部有很微细的多孔网状结构，其空隙大小与被分离的物质分子的大小无相应关系D、一般情况下，凝胶对要分离的物质没有吸附作用，因此所有要分离的物质都应该被洗脱出来3、对凝胶电泳的相关认识错误的是（）A、蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率完全取决于分子的大小B、蛋白质在SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率完全取决于分子的大小C、SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳不仅用于蛋白质相对分子质量的测定，还可用于蛋白质混合组分的分离D、凝胶中加入SDS可以消除静电荷对迁移率的影响4、关于凝胶色谱柱的装填不正确的是（）A、交联葡聚糖凝胶（G—75）“G”表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围，“75”表示凝胶得水值B、色谱柱内不能有气泡存在，一旦发现有气泡，必须重装C、用300mL的物质的量浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液充分地平衡凝胶12hD、凝胶用自来水充分溶胀后，配成凝胶悬浮液5、在装填凝胶柱时，不能有气泡存在的原因是（）A、气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果B、气泡阻碍蛋白质的运动C、气泡与蛋白质发生化学反应D、气泡在装填凝胶的时候，使凝胶不紧密6、有关样品的加入和洗脱的叙述正确的是（）A、先加入1mL透析后的样品B、加样前要使缓冲液慢下降全部流出C、如果红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功D、洗脱时可以用缓冲液也可以用清水7、加有少量柠檬酸钠的猪血分装于①②③试管中，随后依次加入0.3%、0.9%和1.5%的氯化钠溶液稀释，30分钟后...
