研究论文重组人γ2干扰素包涵体稀释复性靳挺关怡新费峥峥姚善泾(浙江大学化学工程与生物工程学系,浙江杭州310027)摘要采用稀释法研究了重组人γ2干扰素包涵体复性条件,如温度、pH值、蛋白浓度、复性液中脲浓度,同时对加样操作方式进行了考察,得到了较为适宜的复性条件.结果表明,脲能有效地抑制复性过程中蛋白质的聚集,合适的脲浓度随复性蛋白浓度的增加而有所增大,在4℃、pH值810、脲浓度110mol·L-1、蛋白浓度011mg·ml-1及脉冲加样操作方式等条件下,复性后重组人γ2干扰素的活性为2139×105IU·ml-1,比活达2121×107IU·mg-1.关键词重组人γ2干扰素包涵体稀释复性中图分类号Q511文献标识码A文章编号0438-1157(2004)05-0770-05RENATURATIONOFRECOMBINANTHUMANINTERFERON2γINCLUSIONBODYBYDILUTIONJINTing,GUANYixin,FEIZhengzhengandYAOShanjing(DepartmentofChemicalandBiochemicalEngineering,ZhejiangUniversity,Hangzhou310027,Zhejiang,China)AbstractTheexperimentalconditions,includingtemperature,pH,denaturedproteinconcentrationandureaconcentration,intherenaturationprocessofrecombinanthumaninterferon2γinclusionbodybydilutionwerestudiedandatthesametimepulserenaturationwastested1Theoptimumrenaturationconditionswereobtained1Resultsshowedthatureacouldsuppresstheaggregationofproteinduringtherenaturationprocessandthesuitableureaconcentrationincreasedwiththeincreaseofdenaturedproteinconcentration1Theactivityandspecificbioactivitywasupto2139×105IU·ml-1and2121×107IU·mg-1respectivelyunder4℃,pH810,110mol·L-1urea,011mg·ml-1proteinandpulserenaturationoperationmode.Keywordsrecombinanthumaninterferon2γ,inclusionbody,renaturationbydilution2003-02-13收到初稿,2003-07-15收到修改稿.联系人:姚善泾.第一作者:靳挺,男,31岁,博士研究生.基金项目:国家自然科学基金(No120076042)及浙江省自然科学基金(No1201099)资助项目.引言人γ2干扰素(IFN2γ)具有重要的生物学活性,主要表现为抗病毒、抗肿瘤(抑制细胞增殖)和对免疫系统的调节作用等[1],由于天然人γ2干扰素生产成本高、产量低,难以大规模应用于临床.1982年美国Genetech公司的Gray等[2]完成了人γ2干扰素基因的克隆和在E1coli细胞内的表Receiveddate:2003-02-13.Correspondingauthor:Prof.YAOShanjing.E-mail:yaosj@che1zju1edu1cnFoundationitem:supportedbytheNationalNaturalScienceFoun2dationofChina(No120076042)andtheNaturalScienceFoundationofZhejiangProvince(No1201099).达,为人γ2干扰素的大规模制备创造了条件.与其他E1coli细胞表达生产的重组蛋白一样,人γ2干第55卷第5期化工学报Vol155№52004年5月JournalofChemicalIndustryandEngineering(China)May2004扰素在E1coli中的表达也会形成不溶的、无活性的包涵体,因此将其转变成有活性的蛋白,即蛋白质复性,是大规模制备人γ2干扰素的关键问题之一.通过体外复性将包涵体转变成具有高活性的重组蛋白是目前生产重组蛋白的一个令人关注的问题,已出现了一些复性方法[3～5],如稀释复性、折叠促进剂协助复性、层析复性、分子伴侣复性等,而稀释复性是一种简单快捷的蛋白质复性方法,也是研究其他复性方法的基础.目前有关重组人γ2干扰素包涵体复性研究较少,因此本论文将通过培养E1coli基因工程菌,获得富含重组人γ2干扰素的包涵体,将包涵体溶解后通过稀释复性法进行人γ2干扰素的复性,重点对影响重组人γ2干扰素包涵体复性过程的条件进行研究,以期获得较为适宜的复性条件,为后续工作打下基础.1材料和方法111实验材料重组人γ2干扰素包涵体由浙江大学生物工程研究所制备[6].人羊膜传代细胞(WISH)和滤泡性口腔炎病毒(VSV)由浙江大学生物工程研究所保存.营养培基含Eagle’s最低限度培养基90%,灭活小牛血清10%,青霉素、链霉素各250IU·ml-1,最后用NaHCO3调pH值至712～714.维持液含Eagle’s最低限度培养基95%,灭活小牛血清5%,其余成分同“营养培基”,此液用于稀释攻击病毒.胰酶混合消化液:1%胰酶(Difco)5ml,加1%的维尔...
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