综畲利用■赫一|lIl。一一米糠蛋白类阿片拮抗肽的离子交换工艺陈季旺，姚惠源，刘清z，夏文水-(1．武汉工业学院食品学院，武汉430023；2．江南大学食品学院，无锡214036)摘要：研究离子交换层析法对米糠蛋白酶解物超滤透过液中类阿片拮抗肽的初步分离提取。采用强酸性阳离子交换树脂，上样流速：SV0．8，上样pH值：5．0；洗脱液氨水浓度：lmol／mL，洗脱速度：SV1．2。离体豚鼠回肠(GPI)检定法鉴定表明，在此条件下制备的米糠蛋白类阿片拮抗肽活性得到提高。关键词：类阿片拮抗肽；离子交换层析法；米糠蛋白中图分类号：TS201．2文献标识码：A文章编号：1005—9989(2005)06—0088—04PreljminaisolationofopioidantigonistpeptidesfrOmricebranproteinbyion-exchangechromatographyCHENJi-wang，YAOHui-yuan2,LIUQing~,XIAWen-shui(1．FoodSchoolofWuhanPolytechnicUnversity，Wuhan430023；2．FoodSchoolofSouthernYangtzUnversity，Wuxi214036)Abstract：OpioidantigonistpeptidesofultrafUtrationpermeatefr0mricebranproteinenzymatichydrolysateswerepreliminarilyisolatedbystronglyacidicion-exchangeresins．TheoptimalconditionswerespeedofSV0．8，pH5．0。andthecolumnwaselutedwithSV1．2and1mol／mLammoniasolution．Theresultsshowedopioidan—tagonistactivityofion-exchangeproductswereenhanced．Keywords：opioidantigonistpeptide；ion-exchangechromatography；ricebranprotein0前言阿片类药物是典型的中枢作用镇痛药，常用于严重创伤或烧伤等锐痛，副作用较为严重，反复应用后易产生依赖性、耐受性和呼吸抑制等。为解决这些问题，食品学家已研究获得了一系列天然的、无副作用的类阿片抗拮肽l。本人采用胰蛋白酶水解米糠蛋白，经分离纯化后获得了一种能拮抗吗啡依赖性和耐受性的类阿片拮抗肽，其相对分子质量为532、6Da。离子交换层析法是利用组分表面电荷性质不同而分离的方法，不同的离子交换剂和分离柱可处理不同的样品量，采用大规模的分离柱，样品处理量可达到工业化生产规模：若使用较小的色谱柱，样品处理量也可小到几毫克。如分离条件选择适当，离子交换层析法可以达到很好的分离效果15--ol。本文采用强酸性阳离子交换树脂作为实验用树脂，对超滤后的米糠蛋白类阿片拮抗肽进一步分离提取，期望能得到纯度较高的类阿片拮抗肽产品。收稿日期：2004—12—10作者简介：陈季~-(1971一)，男，讲师，博士，研究方向为生物技术在食品中的应用。维普资讯http://www.cqvip.com鹂隰1材料与方法1．1实验材料自制米糠蛋白：纯度74．2％；胰蛋白酶(tYFN6．os)：NovoNordisk公司：001x7离子交换树脂：南开大学化工厂；DAGO(I)__丙z一甲硫5一脑啡肽—Glv_o1)：美国Sigma公司；豚鼠(2oo～300g)：中国科学院上海动物中心1．2主要仪器UV1100型紫外一可见分光光度计：北京瑞分析仪器公司；DBS-100电脑全自动部分收集器、DHL—A电脑恒流泵：上海沪西分析仪器厂：冷冻离心机：HI—TACHI公司；超级恒温水浴器：重庆试验设备：能量换能器ss一1O2J：NIHONKOHDEN；台式自动平衡记录仪：上海自动化仪表厂：冷冻干燥器：CHRIST公司；ZFA一1型旋转蒸发仪：上海玻璃仪器二厂：SHB—lU型循环水式多用真空泵：郑州长城科工贸公司。1．3实验方法1．3．1米糠蛋白超滤透过液的制备米糠蛋白溶以6％浓度溶解在去离子水中，以2mol／LNaOH调节pH8．0，以E／S1：100添加胰蛋白酶，水解温度37~C。水解结束后立即把酶解液放人85~C以上热水中15min中止胰蛋白酶的活性。灭酶后的水解液冷却至室温，调pH7．0．1O000g／min离1~,20min，上清液经浓缩后冷冻干燥。冷冻干燥样品以10mg／L浓度溶于去离子水中．以截留相对分子质量为10000Da的聚砜膜、膜压差为0．14MPa、温度为15~C的操作条件超滤，透过液经浓缩后冷冻干燥备用。1．3．2离体豚鼠回肠(GPI)检定法参见参考文献【II1。1．3-3强酸性阳离子交换树脂预处理详见中华人民共和国国家标准离子交换预处理方法。1．34树脂操作容量的测定(静态法)在IOOmLZ角瓶中加入lOmL离子交换树脂和2OraL不同pH值的缓冲液．加入浓度10mg／mL的样品2mL，放在恒温摇床上...
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