农业生物技术学报JournalofAgriculturalBiotechnology2008,16(2):292~298*基金项目：国家自然科学基金项目（No.30470169）资助。**通讯作者。Authorforcorrespondence.副研究员，博士，主要从事植物激素信号转导方面的研究。Email:.收稿日期：20070626接受日期：20071012·研究论文·拟南芥激活标签突变体库的构建及突变体表型的分析*曹冬梅1，2**，范喜英2，王云山1，康黎芳1(1.山西省农业科学院园艺研究所，太原030031；2.中国科学院植物研究所，北京100093）摘要：激活标签技术(activationtagging)在植物功能基因组学的研究中具有重要的作用。实验以拟南芥()为材料，用根癌农杆菌()介导的转化方法，构建了一个含有50000个独立抗Basta株系的激活标签突变体库。其中有47个株系有明显的表型改变，包括花期的改变、株型矮小、叶片形状改变、叶柄变长、叶表皮毛消失、育性降低以及恢复了茎叶处的打折等。并通过TAILPCR和NestedPCR的方法得到了若干TDNA侧翼序列。结果显示突变体含有1～3个拷贝的TDNA插入，分别插入到拟南芥的1、4和5号染色体中。关键词：激活标签技术；拟南芥；表型；TDNA侧翼序列中图分类号:S188文献标识码:A文章编号:10061304(2008)02029207ConstructionofanActivationTaggingLibraryofandMutantPhenotypeAnalysisCAODongmei1,2**,FANXiying2,WANGYunshan1,KANGLifang1Activationtaggingplaysanimportantroleinplantgenomicsstudy.Inthispaper,anactivationtagginglibrarycontainingindependent50000Bastaresistantlineswasconstructedbymediatedtransformationwhichusedmutantasmaterials.Amongthesetransformants,47linesshowedobviousphenotypeswhichweredifferentfrom,containinglatefloweringtime,dwarf,changedleafshape,longerleafpetiole,trichomelessleaf,sterilityandnokinkbetweenstem/leaf.SomeTDNAflankingsequenceswereobtainedbyTailPCRandNestedPCR.ResultsshowedthatthemutantscontainedonetothreeTDNAinsertions,andtheinsertionsdistributedinthefirst,fourthandfifthchromosomeofgenome.activationtagging;;phenotype;TDNAflankingsequence拟南芥()为十字花科(Crucifereae)拟南芥属一年生草本植物。因其具有基因组小、重复序列少、生长周期短、易于遗传转化、生物信息学资源丰富等其它植物无可比拟的优点，从而被科学家当作模式植物，广泛应用于植物生物学的各个研究领域。更重要的是，拟南芥基因组的全序列物理图谱已于2000年12月公布(TheGenomeInitiative,2000)，是第一个基因组被全部测序的植物，这一里程碑式的工作必将对植物生物学的发展产生重大而深远的意义。功能基因组学是后基因组时代的重要研究内容。而突变体已被广泛的应用到正向遗传学研究中，通过对突变体的分析可以了解大量未知序列的功能，目前人们已经利用TDNA的插入在拟南芥中建立了大量的突变体群体，早期的TDNA标签是以基因敲除为目的，产生隐性突变，然而对于具有冗余功能的基因家族却无能为力，因而产生了激活标签（activationtgging）技术，它能使所插入的标签附近的基因过量表达而产生显性突变（Hayashi,1992）,显性突变的表型可以在T1代直接观察到，然而对于显性致死的突变体则很难保留后代。目前利用激活标签系统已成功地分离到许多表型明显的突第2期曹冬梅等:拟南芥激活标签突变体库的构建及突变体表型的分析变体，Weigel.（2000）通过对25000个株系的筛选确定了23个有明显表型的突变体，其中2个是在长日照条件下延迟开花的显性突变体和。MarschMartinez.（2002）将玉米En1转座子组成的激活标签系统应用于拟南芥中，在8300个株系中鉴定了31个显性突变体。油菜素内酯信号途径中，运用激活标签系统发现了BRS1和BAK1（Li,2001;Li.,2002）。编码生长素合成过程的1个限速酶基因也是用该方法分离得到的（Bartel,1997）。近年来，利用此系统已将大量的与植物抗病性、生长发育、代谢以及与环境相互作用的基因鉴定出来（Li,2002;Borevitz,2000;Grant.,2003;Masaki.,2005）。BZR1在BR途径中具...
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