免疫学实验免疫学实验第二次实验第二次实验遵义医学院麻醉学系遵义医学院麻醉学系20201010级级K—1K—1班班3333学号：学号：10205501010205501077对流免疫电泳对流免疫电泳实验内容实验内容【原理】【原理】对流免疫电泳（对流免疫电泳（CIEPCIEP）：基于抗体抗原的等电点彼此）：基于抗体抗原的等电点彼此不通，在通电的琼脂凝胶中抗体向负极泳动，抗原向正极不通，在通电的琼脂凝胶中抗体向负极泳动，抗原向正极泳动。一般抗体（泳动。一般抗体（IgGIgG）的等电点位）的等电点位pH5~9,pH5~9,血清蛋白抗血清蛋白抗原的等电点位原的等电点位pH4~5,pH4~5,所以在所以在pH8.2~8.6pH8.2~8.6的缓冲溶液中，的缓冲溶液中，抗体所带的负电荷较少，正电荷较多抗体所带的负电荷较少，正电荷较多,,同时还受电渗作用，同时还受电渗作用，向负极泳动；抗原带正电荷少负电荷多，分子也较小，电向负极泳动；抗原带正电荷少负电荷多，分子也较小，电泳迁移快。在抗体和抗原的对向泳动时，两者相遇于最适泳迁移快。在抗体和抗原的对向泳动时，两者相遇于最适比例处形成白色沉淀线，可肉眼观察得到结果，此结果为比例处形成白色沉淀线，可肉眼观察得到结果，此结果为阳性结果。阳性结果。电渗作用（电渗是电场中溶液对于固体的相对移动，琼脂是酸性物质，在碱性缓冲液中带负电，而与它接触的溶液带正电，因此液体向阴极移动，产生电渗）【材料】【材料】1.1.正常人血清正常人血清2.2.兔抗人血清，等电点：兔抗人血清，等电点：8.08.03.3.0.05UpH8.60.05UpH8.6巴比妥钠—盐酸缓冲液、生理盐水巴比妥钠—盐酸缓冲液、生理盐水4.4.11%%离子琼脂板用离子琼脂板用0.05U0.05U巴比妥钠—盐酸缓冲液配巴比妥钠—盐酸缓冲液配成成5.5.打孔器、图样板、毛细吸管打孔器、图样板、毛细吸管6.6.电泳仪，电泳槽电泳仪，电泳槽【步骤】【步骤】制离子琼脂板制离子琼脂板先用生理盐水先用生理盐水5050mlml加加1.2g1.2g琼脂隔水煮沸融琼脂隔水煮沸融化，再加化，再加50ml50mlpH8.60.05pH8.60.05mol/Lmol/L巴比妥巴比妥缓冲液继续隔水缓冲液继续隔水煮沸至澄清，取煮沸至澄清，取融化的琼脂融化的琼脂3.3.55～～4ml4ml，浇，浇于载玻片上，待于载玻片上，待其冷却其冷却加样加样对应孔号加试剂对应孔号加试剂放入电泳槽放入电泳槽开启电泳仪开启电泳仪调整电压为调整电压为30V30V电流强度为电流强度为6~8mA6~8mA通电通电1h1h电泳完毕电泳完毕取出琼脂板取出琼脂板观察实验结果观察实验结果打孔打孔（孔径（孔径3mm,3mm,孔距孔距3mm3mm））＋131111222＋－11号内加入抗人血清；号内加入抗人血清；22号加入人血清；号加入人血清；33号号加入生理盐水作对照加入生理盐水作对照抗原抗体【注意事【注意事项】项】11、浇板时，琼脂面要铺平。、浇板时，琼脂面要铺平。22、加样时不要起气泡，勿溢出琼脂孔。、加样时不要起气泡，勿溢出琼脂孔。33、抗原、抗体的量应相接近，如抗原量过多，可造成、抗原、抗体的量应相接近，如抗原量过多，可造成假阴性结果，须通过稀释抗原加以解决。假阴性结果，须通过稀释抗原加以解决。44、电泳时电压不宜过高或过低，过高可能会将琼脂拉、电泳时电压不宜过高或过低，过高可能会将琼脂拉断；过低断；过低时沉淀线出现时间会延长时沉淀线出现时间会延长
