!"卷#期!$$%年%月生物工程学报!"#$%&%’()*$+,(-.#(/%0"$(,(12&’()!"*’)#!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!+,(-!$$%./0/12/3：4/0/56/78，!$$9；:00/;70?8!，!$$%)@?1AB’7CB>AA,;;’7D7>E<1’E>(*><,7>(G01/E0/AH’,E3><1’E’FI?1E>（*’)"$#$$JJK）)"I’77/A;’E31ED>,1(：?/F/ED<1>E99P<’5)0’5国家自然科学基金项目（*’)"$#$$JJK）资助。人!"#$层粘连蛋白受体在毕赤酵母中的表达及活性分析%&’()**+,-.-/012+3+240-.54*+*,6789.-!"#$:.9+-+-;)1)’2,(+-!"#$"%&%’()*"’连继勤8，戴旭芳!，甘立霞8，何凤田8"QR:*+1NS1E8，4:RT,NH>ED!，U:*Q1NT1>8>E3VOH/EDN@1>E8"8第三军医大学生物化学与分子生物学教研室，重庆#$$$"M!重庆师范大学特殊教育学院，重庆#$$$#%83%4+*/5%$/(-.#(0"%5#&/*2+$67(,%0),+*.#(,(12，8"#*67#,#/+*27%6#0+,9$#:%*&#/2，!"($1;#$1#$$$"M，!"#$+!<4%0#+,=6)0+/#($!(,,%1%(-!"($1;#$1>(*5+,9$#:%*&#/2，!"($1;#$1#$$$#%，!"#$+摘要为实现人9%C4层粘连蛋白受体（V,5>E9%C4Q>51E1E./0/;<’7，9%Q.）蛋白的分泌表达，采用4*:重组技术将9%Q.04*:片段插入分泌型酵母表达载体;WRIKX中，构建了相应的重组表达质粒;WRIKXN9%Q.并在UG88J毕赤酵母菌株中表达，每升培养基经亲和层析可纯化目的蛋白8!)J95D。纯化的目标蛋白能够与肺癌:J#K细胞竞争性结合其配体分子Q*N8，具有相应的生物学活性，从而为深入研究人9%Q.的结构与功能奠定了基础。关键词9%Q.，毕赤酵母，蛋白质表达中图分类号S%M文献标识码:文章编号8$$$N"$98（!$$%）$#N$9$!N$J0<*2(.12@’0>77-’,<E9%C4(>51E1E7/0/;<’7（9%Q.），7/0’561E>EA513;WRIKXN9%Q.B>A0’EA<7,0AA/Y;7/AA/31E?#0"#+4+&/(*#&>FE’(，>E3>6’,<8!)J95D/(/0<7’;?’7/A1A;,71<-9%Q.0’,(36/’6<>1E/3>F<1’E’F8Q0,(<,7/,A1ED>FF1E1<-0?7’5><’D7>;?0’(,5E)@$:#/*(0’5;/<1<12/61E31ED>AA>-A?’B/3<<>7D/<;7’A>E/Y0/((/E<61’(’D10>(>0<121<-)@?/A,00/AAF,(/Y;7/AA1’E’F9%Q.?>A;(>0/3>A’(13F’,E3><1’EF’770?’EA<7,0<,7/>E3F,E0<1’EA’F9%Q.)=)4>,(/*9%Q.，?#0"#+4+&/(*#&，;7’51E1E7/0/;<’7，9%Q.）在这一过程中表达上调，且通过与其配体的作用而介导并参与了这一过程的发生。9%Q.是层粘连蛋白（Q>51E1E，Q*）的一种高亲和性非整合素受体，8KM"年首次报道该受体的表达与原发性乳腺癌腋下淋巴结转移的数量相关，!$$$年V1;F/(等用消减杂交技术对恶性黑色素瘤及良性黑痣组织标本中基因表达的差异进行检测，发现9%Q.基因的表达与肿瘤的进程有关［8］。到!$$J年为止已有超过8!$$$例对来自不同器官、不同类型的肿瘤用免疫组化方法证实了9%Q.在浸润、转移甚至肿瘤生长中的作用［!］。因此，弄清9%Q.与其配体的作用关系并设法抑制其活性对于肿瘤的转移抑制治疗具有重要的理论和实际意义。!"#$是表达于细胞膜上的一种受体蛋白，从细胞中直接分离存在成本高、产率低的缺点，而原核表达产物又不具有相应的生物学活性，因此本研究将编码!"#$的%&’(序列插入酵母表达载体)*+,-.中，转化毕赤酵母菌/0112，获得可分泌表达!"#$的菌株。表达菌株受甲醇诱导后，培养基上清经0&03*(/4电泳可看到分子质量约为!"5&的目的蛋白带，而空载体对照没有相应的条带。亲和纯化后!"#$能够与肺癌(26-细胞竞争性结合其配体分子#’31，具有相应的生物学活性。!"#$的表达为探索其结构及与层粘连蛋白结合的分子机制并针对性制备相应的生物学制剂打下了基础。!材料与方法!"!材料重组克隆载体)7,839:!"#$由第四军医大学西京医院消化研究所樊代明院士馈赠；酵母穿梭表达载体（!"#$"%3&;#’("）)*+,-.和!"#$"%)%*+’,"*菌株（/...
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