第2O卷第6期2002年11月泉州师范学院学报(自然科学)Vo1．20No．6JournalofQuanzhouNormalCollege(NaturalScience)Nov．2002甲壳动物血清中凝集素的凝集作用及影响因素戴聪杰，陈寅山(1．泉州师范学院生物系，福建泉州362000；2．福建师范大学生物工程学院，福建福州350007)摘要：用8种单细胞藻类对12种甲壳动物血清进行检测，发现每种甲壳动物血清至少能凝集3种以上的单细胞藻类，其中斜生栅藻(Scenedesmusobliquus)细胞的敏感性最强，能与受检的12种甲壳动物血清产生凝集．同时进行糖抑制，温度、pH和ca影响试验．结果表明，每种凝集素对斜生栅藻的凝集活性都可被1种或多糖抑制。12种甲壳动物血清凝集素的温度和pH适应范围表现不一，但它们的凝集活性都被EDTA所抑制．关键词：甲壳动物；凝集素；藻类；影响因素中图分类号：Q959．233文献标识码：A文章编号：1009—8224(2002JO6—0076-06凝集素是生命体内广泛分布的一种天然的非免疫性蛋白或糖蛋白，具有众多的生物学性质n]，其中最重要的是能识别细胞表面的糖基团，有选择性地凝集不同种类的细胞，对凝集素的筛选和活性检测，常用各种脊椎动物红细胞L6]、肿瘤细胞、淋巴细胞、骨髓细胞Lg]、精子细胞作凝集原，很少使用单细胞藻类和微生物细胞或孢子等．直到1996年HoriL1等才首次报道了植物凝集素对海洋单细胞藻类的凝集作用．本文以8种单细胞藻类为凝集原，对12种甲壳动物血清凝集素进行检测，这将为反过来以这些凝集素作为分子探针，研究藻类细胞表面的糖脂和糖链结构开辟一条新路，并提供基础资料．1材料和方法1．1甲壳动物血清的制备选取健康的日本对虾(Penaeus血ponicus)、南美白对虾(Penaeusvanaminas)、罗氏沼虾(Mac．robrachiumrosenbergil)、日本沼虾(Macrobrachiumjaponicus)、脊条褶虾蛄(Lophosquillacostata)、斑纹婿(Charybdisferiatus)、日本绒螯蟹(riocheirjaponicus)、红星梭子蟹(Portunussanguinolen．tus)、三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)、远洋梭子蟹(Portunuspelagicus)、锯缘青蟹(Scyllaserrata)、相手蟹(Sesarmasp)等12种甲壳动物，带回实验室洗净，分类鉴别．虾类用经过高压灭菌的1ml、5号针头注射器从围心室内抽取血样．蟹类剪肢放血．收集各种甲壳动物血淋巴液收稿日期：2002一O4—11作者简介：戴聪杰(1966一)，男，讲师，硕士．基金项目：泉州市科技项目计划资助(Z200239)维普资讯http://www.cqvip.com第6期戴聪杰等：甲壳动物血清中凝集素的凝集作用及影响因素77经受4500rpm(r=15cm)离心10min，上清液为血清型样品，在血清中加入达到体积2倍浓度的TBS—Ca溶液(TBS：0．14mol·L～Nacl，0．01mol·LI1Tris—HCI，pH7．4；TBS—Ca抖：TBS0．01mol·L～CaCI：，pH7．4)，然后经凝集活力和蛋白质浓度测定后，放冰箱备用．1．2藻类细胞悬液的制备巴夫藻(Pal0mv~ridis．)、盐藻(DunaliellⅡ8Ⅱlina)、塔胞藻(Pyramimonassp．)、海产小球藻(6~lorellavulga~)、亚心型扁藻(Platyrmona$cordiformis)用无菌海水；斜生栅藻(Seenedesmusobliquus)和蛋白核小球藻(Chlorellapyreoidosa)用0．85无菌生理盐水，紫球藻(Porphyridiumpurpureum)用无菌海水与无菌生理盐水(1：1w／w)配成的混合液稀释，经3000rpm(r=15cm)离心15min，离心洗涤两次，再用相应的无菌水稀释配成藻类细胞悬液，终浓度约为8．0x10个ml～．1．3甲壳动物血清凝集单细胞藻类的活力测定在孔中加入25l甲壳动物血清溶液，再加入等量的藻类细胞悬液，均匀摇动1min，室温下放置2～3h后在显微镜下观察凝集反应结果．针对不同的藻类，分别用等量无菌海水，无菌生理盐水，无菌海水与生理盐水混合液代替甲壳动物血清溶液，作为阴性对照．呈阳性反应的甲壳动物血清，在V型板上进行倍比稀释后与等量敏感的藻类细胞进行凝集反应测定其凝集效价．以有单细胞藻类凝集活力的最大稀释度为该样品的凝集活力(计为2“)．1．4环境因素对凝集素的影响’1．4．1温度对甲壳动物血清凝集活力的影响将甲壳动物血清置于密闭的容器中，然后分别在4℃冰箱及温度为40、50、60、70、80、90℃水浴中保温10min后取出，待其冷却至室温后用斜生栅藻细胞悬液检测其凝集活力．1．4．2...
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