复方青黛饮含药血清对体外HaCaT细胞增殖和凋亡的影响来源：互联网更新时间：2009-8-2610:41:18查看次数：269复方青黛饮含药血清对体外HaCaT细胞增殖和凋亡的影响李文彬1，冯捷1，马慧群1，闫小宁2，张彩晴3细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响，并探讨其作用机制。方法根据中药血清药理学方法，用SD大鼠制备实验血清，采用MTT法、流式细胞术、免疫荧光Hoechst染色，观察含药血清对细胞生长抑制率、凋亡率、细胞周期分布及细胞形态学的影响。结果体外培养），其中高剂量组抑制作用最明显。复方青黛饮含药血清组细胞凋亡率和G0/G1比例明显增加，与空白血清组相比，差异有统计学意义（P<0.05），在镜下呈现凋亡的特征性形态改变。结论复方青黛饮大鼠含药血清对体外培养的角质形成细胞株；2DepartmentofDermatology,ShaanxiTraditionalChineseMedicalHospital,Xi′an710004,China；3The323PLAHospital，Xi'an710054,China）［CorrespondingauthorToinvestigatethemechanismofcompoundindigonaturalisdecoctionintreatingpsoriasis,weobservedtheeffectofinactivatedmouseserumcontainingcompoundindigonaturalisdecoctionontheproliferation,apoptosis,andcellcycleofHaCaTcellinvitro.MethodsTheexperimentalanimalserumwastakenfromSDratsandwasinactivatedbeforetheexperimentonthebaseoftheserumpharmacologymethod.ThentheserumatdifferentconcentrationofcompoundindigonaturalisdecoctionserumwasaddedtoHaCaTcell.Thecontrolwassetmeanwhile.Thecellgrowthwasevaluatedbymethylthiazolyltetrazolium(MTT)assay.Thecellcycledistributionandcellapoptosisweremeasuredbyflowcytometry.ThecellmorphologywasobservedbyHoechststainingunderfluorescencemicroscope.24h,48h,comparedwiththeblankgroup,thecellproliferationofHaCaTwasinhibitedsignificantlyinhighdose,mediumdose,lowdosegroups（P<0.05）.Comparedwiththatoftheblankgroup,thecellapoptoticrateandcellpercentageinG0/G1phaseobviouslyincreasedinhighdose,mediumdose,lowdosegroupsthatcompoundindigonaturalisdecoctionserumnotonlyinhibitedtheproliferationofHaCaTcells,butalsosignificantlyinduceapoptosis.Affectingcellcyclemightcontributetothemechanism.银屑病是一种常见易复发的慢性炎症性皮肤病，对患者的身心和生活质量均造成一定程度的影响。复方青黛饮是本科经多年临床实践总结的治疗银屑病的经验用方，对中医辩证分型“血热型”疗效显著。由于中药成分复杂，其具体作用机制不明，本实验以人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞为研究对象，对复方青黛饮治疗银屑病的作用机制进行探讨。HaCaT细胞（张彩晴博士惠赠），复方青黛饮（组分：由青黛、贯众、紫草、蒲公英、马齿苋、丹参、白芷、焦山楂、建曲、五味子等组成，生药购自西安交通大学医学院第二附属医院药房，水煎制成含生药量为Hoechst33258试剂盒购自碧云天生物技术有限公司，AnnexinVFITC试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司。复方青黛饮煎液灌胃给药，大鼠随机分为高、中、低三个剂量组，每组10只，给药剂量（折合生药）为高剂量组60.18g/kg，中剂量组为30.9g/kg，低剂量组为15.45g/kg（分别相当于成人临床推荐剂量的20倍、10倍和5倍），均2后弃培养液，加入高、中、低3种剂量含药血清和正常血清，各组设5%，10%，20%，40%，80%不同血清浓度，每孔均为100μL，设6个复孔；分别于培养24h和48h时，每孔加入10μLMTT(5mg/mL)70%时，弃培养液，加入各组实验血清，每组设3个复孔；48h后，按Hoechst33258试剂盒说明书进行染色，然后在荧光显微镜下观察细胞形态，并拍照。，按试剂盒说明书对细胞进行染色，并用流式细胞仪检测。1.4统计学分析应用SPSS12.0软件。实验结果用(x±s)表示，组间比较采用onewayANOVA和LSDt检验，P<0.05为差异有统计学意义。细胞增殖抑制率比较，差异无统计学意义，余各血清浓度的各剂量组对HaCaT细胞增殖抑制率之间比较，差异有统计学意义（P<0.05）；经LSDt检验，除24h、5%血清浓度的中、低剂量组...
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