中国农业科学2008,41(10):3249-3255ScientiaAgriculturaSinicadoi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.043收稿日期：2007-08-27；接受日期：2007-10-30基金项目：国家科技部奶业支撑计划（2006BAD04A12，2006BAD04A01）作者简介：狄和双（1979-），女，河北南皮人，博士研究生，研究方向为动物生殖生理与调控。Tel：15896006815；E-mail：dhsh1979@163.com。通讯作者王根林（1957-），男，江苏靖江人，教授，研究方向为动物生殖生理与调控。Tel：025-84395045；E-mail：glwang@njau.edu.cnTGF-β1对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡及HSP70蛋白表达的影响狄和双，杜娟，张中霞，黄静燕，崔群维，程凯宁，王根林（南京农业大学动物科技学院，南京210095）摘要：【目的】探讨TGF-β1对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡和HSP70蛋白表达的影响。【方法】TGF-β1作用乳腺上皮细胞不同时间，收集细胞及培养液，应用MTT检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡率、比色法检测LDH活性、琼脂糖凝胶电泳检测DNA完整性、Westernbolt技术分析HSP70蛋白的表达量。【结果】1、5、10ng·ml-1的TGF-β1均能抑制乳腺上皮细胞的增殖，且随浓度增加抑制作用加大，呈现剂量依赖性，其中10ng·ml-1TGF-β1组与对照组差异显著（P＜0.05）；10ng·ml-1TGF-β1作用于乳腺上皮细胞,随着作用时间的延长，细胞凋亡率逐渐升高，其中6、12和24h与对照组相比差异极显著（P＜0.01）；LDH活力随作用时间延长而升高，12、24h与对照组差异极显著（P＜0.01）；DNA完整性随TGF-β1作用时间的延长发生不同程度降解；TGF-β1作用2～6h细胞大量表达HSP70，6h达到高峰，而后下降，2～12h的表达量均极显著高于对照组（P＜0.01）。【结论】TGF-β1可以抑制奶牛乳腺上皮细胞的增殖，具有浓度依赖性。10ng·ml-1TGF-β1可以显著增加细胞凋亡率，提高细胞培养液中LDH活力，使细胞DNA发生不同程度的降解，同时HSP70蛋白随TGF-β1作用时间发生显著的表达变化。本试验结果表明，TGF-β1可以以促进上皮细胞凋亡的方式，促进奶牛乳腺发生退化。关键词：TGF-β1；乳腺上皮细胞；细胞凋亡；HSP70EffectsofTGF-β1onProliferation,ApoptosisandHSP70ExpressionofMammaryEpithelialCellsofDairyCowDIHe-shuang,DUJuan,ZHANGZhong-xia,HUANGJing-yan,CUIQun-wei,CHENGKai-ning,WANGGen-lin(AnimalScienceandTechnologyCollegeofNanjingAgriculturalUniversity,Nanjing210095)Abstract:【Objective】TheaimsofpresentstudyweretoinvestigatetheeffectsofTGF-β1onproliferation,apoptosisandHSP70expressionofthemammaryepithelialcellsofdairycow.【Method】BovinemammaryepithelialcellswereculturedinDMEM/F12+10%CSmediumwithTGF-β1andcellsandsupernatantwerecollected.Thecellproliferationandapoptosis,activityofLDH,integrityofDNA,andexpressionofheatshockprotein70(HSP70)weredetectedbyMTT,Flowcytometry,lactatedehydrogenase(LDH)kit,agarosegelelectrophoresisandWesternbolt,respectively.【Result】TheresultsshowedthatcellsproliferationswereinhibitedaftertreatedwithTGF-β1indosedependentway.TherateofapoptosiscellssignificantlyincreasedaftertreatmentwithTGF-β1for6,12,24hours（P＜0.01）.TheactivityofLDHwassignificantlyhigherinthetreatedgroupsthanthatinthecontrolgroup（P＜0.01）.ThenucleotideofDNAwasdegradatedgraduallyastreatmenttimeincreased.TheexpressionofHSP70increasedafterTGF-β1treatmentformorethan2hoursanditreachedthehighestlevelwhentreatedfor6h,thendecreased.【Conculsion】TGF-β1couldinhibittheproliferationofbovinemammaryepithelialcellsinadose-dependentway.Atadoseof10ng·ml-1,TGF-β1couldsignificantlystimulatecellapoptosisandincreaseLDHactivity,whichwereresultedindegradationofDNA.3250中国农业科学41卷Long-termcultureofbovinemammaryepithelialcellswithTGF-β1couldleadtotheup-regulationoftheexpressionofHSP70.ItissuggestedthatTGF-β1couldpromotetheapopt...
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