第40卷第2期VoL40No．2淡水渔业FreshwaterFisheries2010年3月Mar．20lO产胞外蛋白酶菌株的筛选及环境因素对其产酶活性的影响鲜莹，谢从新，何绪月9，杨慧君，胡雄，陈柏湘(华q-农业大学水产学院，武汉430070)摘要：采集渔．稻复合系统中的水稻根际淤泥，筛选出有较强产胞外蛋白酶能力的菌株并研究环境因素对其产酶活性的影响。结果显示，通过初筛、蛋白酶复筛等筛选得到一株菌株(编号PaOg)；此菌株所产产胞外蛋白酶能够促进水体中有机物质发生氨化反应，减少有机氮含量。此菌还具有产胞外碱性磷酸酶的能力。菌株鉴定结果显示此菌为芽孢杆菌。PR09菌株所产的胞外蛋白酶在67℃下酶活性最为活跃，最适pH为7，属于中性蛋白酶。关键词：芽孢杆菌(bacillus)；胞外蛋白酶；氮化合物；温度；酶活中图分类号：S965．119；Q41s文献标识码：A文章编号：1000-6907．(2010)02-0053-04Screeningofextracellularprotease-producingbacteriaandeffectofenvironmentalfactorsOiltheproteaseactivityXIANYing，XIECong-xin，HEXu—gang，YANGHui-jun，HUXiong，CHENBo—xiang(CollegeofFisheries，HuazhongAgriculturalUm,”rsuy，Wuhan430070)Abstract：ExtraceUularprotease—roducingbacteriawerescreenedfromthesoilinthecompoundsystem．andtheeffectofenvironmentalfactorsontheproteaseactivityw踮studied．Theresultsshowedthat：abacterialstrainfNo．PR09)wasob—tainedviaprimaryscreeningandproteaseactivitydetermination，andidentifieda8bacillus．Theextracellularproteagepro-ducedbyPR09couldcatalyzethereactionofammonizatiOiltoreducetheorganicnitrogencontent．Thisbacterialstraincanalsoproduceextracellularalkalinephosphatase．Themostsuitabletemperatureforproteasewas67℃，andthepHwaft7，itWagneutralprotease．Keywords：bacillus；extracelhlarprotease；nitrogencompound；temperature；activityofenzymes近年来，随着水产养殖业迅猛发展，环境问题也逐渐成为影响生态经济效益的重要因素。在养殖过程投喂的大量氮、磷营养物质中，只有一小部分供给养殖鱼类用于生长，大部分则沉积于池底或溶于水体中，造成水体有机物质污染，导致水体富营养化，从而影响水产养殖业持续健康发展；因此消除转化过多的有机物成为改善养殖环境的研究重点[1-5]。国内外研究通常采用多种微生物混合的微生态制剂来进化水质，将微生物固定于特殊的膜结构或反应器内投入污染水体，依靠微生物的分解毹力去除有机质，取得了显著成效妒¨。研究显示稻田对池塘养殖废水具有净化作用坤J。本试验从渔．稻复合系统中净化养殖废水的稻田根际淤泥中筛选拥有较强产胞外蛋白酶能力的菌株，加以培育，研究其胞外蛋白酶对水体含氮化合物的影响，以期为改善水体富营养化和微生态制剂的进一步发展提供一定的依据。收藕日期：2009—12一lO资助项目：国家支撑计划(2006BAD03801；2007BAD37802)；现代农业产业技术体系建设专项资金资助(NYCYTX一49)第一作者简介：鲜莹(1985一)，女，硕士研究生，专业方向为湿地资源与环境。E·mail：shimoyuto@webmaiLhzau．edILcn通讯作者：谢从新。E—mail_*xieeongxin@maiLImm．挑CB万方数据淡水渔业1材料与方法5在,367≮磊；景蔻譬卺麓：袅篙嚣耄1．1材料与设备菌株产胞外蛋白酶活性的影响。。匕平板培养基：牛肉膏3兰：蛋白胨5g／L，琼结果与分析脂拶n,／一1．，NMI．I，调至．～．9。218NaC5g／LpH7072。”7。’。7。”。LB培养基：胰蛋白胨10g／L，酵母提取物5g／L，氯化钠10g／L，pH调至7．0。蛋白酶筛选培养基：酪蛋白10g／L，酵母膏lg／L，琼脂15g／L，pH调至7．2。1．2菌株筛选1．2．1土壤采集、菌株初筛土壤与底泥采集于湖北省洪湖金地农业科技发展有限公司实验基地的稻田和鱼塘。按照《土壤微生物生态学及其实验技术》的方法【9J，制备土壤样品稀释液，进行涂布分离培养(37℃，48h)，选出不同菌落划线培养(37℃，48h)。1．2．2目的菌株的筛选将初筛菌株分别接种在蛋白酶筛选培养基上，24h后，将出现水解现象的菌株接种到LB液体培养基，每瓶30mL，37℃恒温摇床培...
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