第四章细胞培养的基本技第四章细胞培养的基本技术术解放军总医院基础医学研究解放军总医院基础医学研究所所免疫学研究室免疫学研究室黄建华黄建华细胞培养技细胞培养技术平台术平台基因治疗基因治疗基因诊断基因诊断试管婴儿试管婴儿组织工程组织工程药物筛选药物筛选致病机理致病机理主要内容主要内容基本操作技术和要求基本操作技术和要求原代培养原代培养传代培养和细胞系的维持传代培养和细胞系的维持细胞冻存与复苏细胞冻存与复苏细胞培养污染的检测和排除细胞培养污染的检测和排除细胞是生命活动的基本单位细胞是生命活动的基本单位16651665年英国学者年英国学者RobertHookeRobertHooke，用自制的显，用自制的显微镜观察软木的薄片，第一次发现植物的细胞结构，微镜观察软木的薄片，第一次发现植物的细胞结构，并首次借用拉丁文并首次借用拉丁文CellaCella（小室）词（小室）词..1983-391983-39德国植物学家施莱登和动物学家施旺德国植物学家施莱登和动物学家施旺确立确立了“细胞学说”的基本原则。了“细胞学说”的基本原则。（１）细胞是有机体，动植物都是由细胞发育来的；（１）细胞是有机体，动植物都是由细胞发育来的；（２）每个细胞都作为一个相对的独立单位，有自己（２）每个细胞都作为一个相对的独立单位，有自己的的““生命生命””。。（３）新的细胞可以通过老的细胞繁殖产生。（３）新的细胞可以通过老的细胞繁殖产生。进化论，遗传学和进化论，遗传学和细胞学说细胞学说定为现代生物学的三大基定为现代生物学的三大基石，而细胞学说又是后二者的石，而细胞学说又是后二者的""基石基石""。。组织（细胞）培养组织（细胞）培养从生物体内取出细胞（组织），模拟体内生理环境，从生物体内取出细胞（组织），模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存、生在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存、生长并维持其结构和功能的方法。长并维持其结构和功能的方法。细胞（组织），包括器官培养终归是离体培养，缺少细胞（组织），包括器官培养终归是离体培养，缺少生物整体的严密联系，不能代表整个机体。在进行医生物整体的严密联系，不能代表整个机体。在进行医学生物实验过程及对结果的评估是都必须考虑这些。学生物实验过程及对结果的评估是都必须考虑这些。11基本操作技术和要求基本操作技术和要求由于体外培养的细胞没有抗感染能力，由于体外培养的细胞没有抗感染能力，因此防污染是决定培养成功的首要条件。因此防污染是决定培养成功的首要条件。一切操作需要一切操作需要保证无菌保证无菌和有条不紊。和有条不紊。1.11.1培养室内的无菌技术培养室内的无菌技术培养前的准备：按实验计划和程序准备培养前的准备：按实验计划和程序准备物品，作到心中有数物品，作到心中有数培养室和超净台：定期全面彻底消毒培养室和超净台：定期全面彻底消毒培养用品的无菌处理：高压灭菌、过滤、培养用品的无菌处理：高压灭菌、过滤、酒精消毒酒精消毒实验中无菌培养操作：均在火焰近处进实验中无菌培养操作：均在火焰近处进行，实验用品需火焰灭菌，冷却后接触行，实验用品需火焰灭菌，冷却后接触培养细胞，以防烧死细胞培养细胞，以防烧死细胞。。1.21.2培养细胞的取材培养细胞的取材基本要求：基本要求：取材组织用培养液浸泡，取材组织用培养液浸泡，44度运送，度运送，2424hh内尽快培养。内尽快培养。取材无菌操作，避免对组织的机械损伤，取材无菌操作，避免对组织的机械损伤，尽量去除脂肪、神经、结缔、坏死组织，尽量去除脂肪、神经、结缔、坏死组织，污染组织可用青链霉素和制霉菌素漂洗污染组织可用青链霉素和制霉菌素漂洗。。原代取材同时保留组织学和电镜标本，对原代取材同时保留组织学和电镜标本，对供体来源、部位及一般情况做记录。供体来源、部位及一般情况做记录。1.2.31.2.3皮肤和粘膜的取材皮肤和粘膜的取材皮肤和粘膜是上皮细胞培养的重要来源。皮肤和粘膜是上皮细胞培养的重要来源。取材方法似断层皮片手术，面积取材方法似断层皮片手术，面积2-2-33mmmm2....
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