免疫胶乳浊度分析在自动生化分析仪上的应用免疫比浊回顾免疫胶乳浊度分析（immunolatexturbidimetry）在生化分析仪上进行测定的有关问题2免疫比浊3免疫检测的基础抗原抗体间的特异性反应手工操作自动化分析核心—基础免疫比浊技术是在免疫沉淀反应（Precipitation）检测法的基础上建立的。最早应用的免疫沉淀反应是Ouchterlony在1948年建立的琼脂双向扩散法。1965年Mancini等和Fahey等分别建立了可以定量的单向（辐射状）免疫扩散技术。Laurell等1966年建立了电免疫扩散法，使报告结果的时间由单向免疫扩散法的≥24h缩短到4-5h。4免疫比浊经典的免疫沉淀试验通常是在抗原与相应抗体反应的终点判定结果，存在费时、操作繁琐、敏感度低（10～100mg/L）、不能自动化等缺陷。根据沉淀反应时，抗原抗体结合后可使反应系统透光度发生改变，建立了以测定透光度为特征的微量免疫沉淀测定法法，既免疫浊度测定技术。5免疫比浊1967年由Richie首次报告，20世纪70年代逐步完善，80年代初期初步应用临床常规检查。抗原抗体在液相（特殊的缓冲液）中快速结合，形成抗原抗体复合物，反应液出现浊度。6免疫比浊液相中抗原与抗体的反应结果与两者的浓度比例有关。抗原或抗体显著过量时，都只能生成少量的可溶性免疫复合物，分子极小，不适于免疫比浊法检测。免疫比浊技术要求溶液中抗体要保持中等过量，此时免疫复合物（immunecomplex，IC）仍是可溶性的。在这种情况下，抗原与抗体的反应遵循质量作用定律（Ag+Ab＝Ag.Ab），形成IC的量是抗原或抗体的函数。当抗体固定时，IC的量与抗原的量成正比。7免疫比浊8LIGHTSOURCEFILTERREACTIONCUVETTETURBIDIMETRICDETECTORNEPHELOMETRICDETECTORIC散射比浊、透射比浊光路图θ透射光+散射光散光射平光线目前，国内开展的各项免疫检验，均求使用国家食品药品监督管理局（SFDA）准入和批准的仪器和试剂。这样做不仅能使各项检查更加统一，规范，各实验室之间检查结果更具可比性，而且也可避免很多不必要的医疗纠纷。免疫比浊技术中散射比浊法目前均用获国家食品药品监督管理局（SFDA）批准进口的自动化分析仪器和配套的各种检测项目的专用试剂。透射比浊法（生化分析仪）可用国产试剂。9——全国临床检验操作规程第3版透射还是散射散射比浊专用仪器专用配套试剂原装进口试剂昂贵透射比浊生化分析仪开放试剂（可用国产试剂）10a)速率法和终点法测定；b)速率法的灵敏度和特异性优于终点法；终点法的稳定性较好；透射还是散射目前，由于技术的发展，两种比浊法的灵敏度和特异性已接近，而全自动生化仪的自动化程度和精密度要胜于专用散射比浊仪，透射免疫比浊法在临床上的应用日益广泛。生化分析仪通过免疫比浊法技术，架起了现代生化检验和现代免疫技术的桥梁。免疫化学是免疫学技术和生物化学技术的结合。既具有免疫学抗原抗体结合的特异性，又具有生物化学反应动力学特点。11透射还是散射透射免疫比浊可溶性抗原与其特异性抗体，在一定缓冲液中形成的复合物，经一段时间聚合后出现浊度，人射光在渗过反应液时，由于溶液内IC粒子对光线的反射和吸收，引起透射光减少，可用吸光度A表示。用已知浓度的标准参考品建立标准曲线，测出待测抗原的含量。透射比浊法主要用于生化分析仪。12透射免疫比浊免疫复合物直径为35～lOOnm，这一范围要求近紫外光处入射光发出最大的干扰(最大吸收峰)，选择290～410nm波长测定最佳。由于抗原抗体结合后在短时间内(<19s)只能形成小复合物，无法进行比浊，需要等几分钟到数小时(>19s)形成可见的复合物，才能进行比浊。为了提高复合物形成速度，加入促聚剂，如4％聚乙二醇(MW：6000～8000)，可使复合物形成在3～10min完成。13比浊法中，少量的小的抗原抗体复合物极难形成浊度，除非放置较长时间；如形成较大的复合物，则抗原和抗体用量也较大，显然不符合微量化的要求。为解决快速反应及微量化的要求，建立了免疫胶乳浊度法（immunolatexturbidimetry）。14免疫胶乳浊度分析（immunolatexturbidimetry）其基本原理是：a)将特异性抗体吸附在大小适中、均匀一致的胶乳颗...
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