实验一细菌的形态与染色一.录像：微生物学发展史二.实验室规则介绍（生物安全）三.细菌形态示教及示教操作四.学生操作：革兰染色法（Gramstain)五.作业实验室规则介绍（生物安全）牢固树立“有菌观念”严格执行“无菌操作”严防“杂菌污染”实验室规则介绍（生物安全）一.安全使用水、电、煤二.保持实验室安静有序、爱护实验器材三.培养良好习惯，树立自我保护意识穿实验服不在实验室内吃东西不将任何实验材料（如细菌涂片、细菌培养物）携带出实验室实验室规则介绍（生物安全）若有传染性材料污染桌面、地面、书、衣物或人体，应立即报告教师，并在教师指导下进行消毒处理实验用过的物品归还原处，带有传染性的吸管、玻片等，必须放在指定地点实验结束后，清洗消毒（0.1%新洁尔灭溶液中浸泡）双手后方可离开四.做好实验室清洁卫生工作细菌形态示教及示教操作1.细菌的形态结构细菌的大小及排列细菌的基本结构2.细菌的特殊结构荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢3.细菌的染色检查法细菌形态示教——荚膜肺炎球菌荚膜（capsule）细菌形态示教——鞭毛、菌毛菌毛pilus电镜下变形杆菌周身鞭毛flagellum光学显微镜下细菌形态示教——芽孢破伤风杆菌芽孢endosporeofC.tetani光学显微镜下形态电子显微镜下形态G+菌G-菌等电点PI2~3PI4~5带负电荷多带负电荷少通透性低高肽聚糖多，脂质少肽聚糖少，脂质多酒精不易进入酒精易进入Gramstain原理Gramstain意义1.鉴别细菌：分成G+菌和G－菌2.选择药物：G+菌和G－菌对抗菌药物敏感性不一样3.与致病性有关：G+菌产生外毒素G－菌产生内毒素革兰染色法Gramstain学生操作：两人一组材料：两人一组菌种：表皮葡萄球菌及大肠杆菌斜面各一支玻片每人1张革兰染色液一套接种环每人一支革兰染色法Gramstain基本过程：1.涂片2.干燥3.固定4.染色接种棒冷却事先加好NS量少革兰染色法Gramstain1.涂片制备：按下图分别加生理盐水各一滴，再按下图分别加菌研匀菌1菌1+菌2菌2革兰染色法Gramstain制备一张好涂片的基本要素：1.玻片不含油脂(若有油脂可用卷筒纸蘸95%酒精擦干净)。2.生理盐水应尽量少加。3.取菌不宜过多。2.干燥：自然干燥或烘干（标本面朝上）3.固定：热固定（火焰上来回通过3次固定）目的：1.使细胞质凝固,以固定细胞形态,并使之牢固附着在载玻片上。2.杀死细菌，操作更安全涂片结晶紫初染1min碘液媒染1min95%酒精脱色30s复红复染30s水洗，干革兰染色全过程示意图（紫碘酒红，11半半，每次水洗，阳紫阴红。）水洗，干烘干,油镜检水洗，干水洗，干水洗，干实验报告（格式）一.目的二.材料与方法三.结果（需用彩笔画示意图）四.分析与讨论作为平时成绩记入总成绩作为平时成绩记入总成绩革兰染色影响因素分析1.脱色是关键2.菌液涂片不能太厚3.细菌生长周期的影响细菌形态示教（革兰染色）Streptococcus链球菌streptococcus链球菌Staphylococcus葡萄球菌E.Coli大肠杆菌细菌形态示教美蓝染色奈瑟染色脑脊液标本涂片中的脑膜炎双球菌1.分成10组，每组2~3人，每组成员参与讨论1次，以小组计成绩，占总成绩的10%。2.评价指标包括以下5个方面（每个指标2分）：A.主题明确，讲解思路清晰并能即兴回答提问B.口头表达能力强，语言生动流畅，能吸引学生的注意力C.PPT制作精美，重点突出并与讲解内容协调D.资料准备翔实，数据可靠E.有良好的团队协作精神讨论课基本要求讨论课安排1.消毒与灭菌（实验二）2.奈瑟菌（实验三）3.细菌感染的实验室诊断（实验四）4.微小杆菌等（实验七）5.梅毒螺旋体（实验八）6.钩端螺旋体（实验八）7.立克次体（实验八）8.支原体（实验八）9.衣原体（实验八）10.真菌（实验九）由专人负责安排讨论课讨论课提纲：消毒与灭菌1、何为消毒、灭菌、防腐、无菌？2、你认为在哪些情况下常会使用到消毒与灭菌技术？3、消毒与灭菌通常可使用哪些方法？4、湿热的灭菌效果为什么比干热要好？5、当对某一件器物既可用物理方法也可用化学方法进行消毒灭菌时，你认为应该优先选哪一种方法较好？为什么？6、你认为物理或化学方法可导致微生物或感染因子灭活或死亡的机理是什么？注：讲解时间必须控制在20min之内，留5min让其他同学或老师提问？要求讲解者及其同小...
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