实验一邻二氮菲分光光度法测定微量铁一.实验目的和要求1、掌握紫外可见分光光度计的根本操作；2、掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的原理和方法;3、掌握吸收曲线绘制及最大吸收波长选择；4、掌握标准曲线绘制及应用.二.实验原理邻二氮菲（1,10一邻二氮杂菲）是一种有机配位剂,可与Fe2+＞成红色配位离子在pH=3~9范围内,该反响能够迅速完成,生成的红色配位离子在510nm波长附近有一吸收峰,摩尔吸收系数为了1.1x104,反响十分灵敏,Fe2+浓度与吸光度符合光吸收定律,适合丁微量铁的测定.实验中,采用pH=4.5-5的缓冲溶液保持标准系列溶液及样品溶液的酸度；采用盐酸羟胺复原标准储藏液及样品溶液中的Fe3+并预防测定过程中Fe2^空气氧化.三.实验仪器与试剂1.752型分光光度计2.标准铁储藏溶液（1.00X10-3mol/L）3.邻二氮菲溶液（0.15%,新鲜配制）4.盐酸羟胺溶液（10%新鲜配制）5.醋酸盐缓冲溶液6.50ml容量瓶7个7.5ml移液管4只8.1cm玻璃比色也2个9.铁样品溶液四.实验步骤：1、标准系列溶液及样品溶液配制根据下表配制铁标准系列溶液及样品溶液编勺1234567(标准铁溶液)1x10-3M标准铁溶液0.00ml1.00ml2.00ml3.00ml4.00ml5.00ml2.50ml10%盐酸羟胺溶液1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml0.15%邻二氮菲溶液5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml醋酸盐缓冲溶液5.00ml5.ooml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml说明以上溶液均用移液管移取至50ml容量瓶中,用蒸僻水稀释至刻度并摇匀.系列标准铁溶液浓度00.02mol/ml0.04mol/ml0.06mol/ml0.08mol/ml0.10mol/ml—2、吸收曲线绘制用1cm比色血,以1号溶液作为了参比溶液,测定4号溶液在各个波长处的吸光度,在坐标纸上以测定的吸光度为了纵坐标,波长为了横坐标,绘制吸收曲线,并从吸光曲线上找出最大吸收波长.测定波480n482n484n486n488n490n492n494n496n498n长mmmmmmmmmm吸光度0.6360.6370.6390.6410.6440.6520.6560.6560.6580.673测定波500n502n504n506n508n510n512n514n516n518n长mmmmmmmmmm吸光度0.6780.690.6920.6990.70.6820.6790.6710.6610.637测定波520n522n524n526n528n530n532n534n536n538n长mmmmmmmmmm吸光度0.6130.6010.5660.5340.5030.4680.4450.3960.3620.33选择的最大吸收波长为了:508(nm)绘图如下:3、标准曲线制作在选定最大吸收波长处,用1cm比色血,以1号溶液作为了参比溶液,分别测定2至7号溶液的吸光度,在坐标纸上以吸光度平■均值为了纵坐标,系列标准溶液的浓度为了横坐标制图,绘制标准曲线.编号234567（样品溶液）吸光度A10.2360.4630.70.9361.1270.573吸光度A20.2360.4630.70.9361.1270.573吸光度A30.2360.4630.70.9361.1270.573A平均值0.2360.4630.70.9361.1270.573绘图如下:实验数据处理：1.样品溶液中铁含量计算C读取值=(0.573-0.0159)/11.257=0.04952Cx=C读取值X50.00/2.50=0.49X20=0.99(mol/ml)=0.99x10-3(mol/L)吸收曲线浓度（mol/ml）2.摩尔吸光系数计算£=(A2—A1)/(C2—01)=(0.466—0.242)/(0.04X10-3—0.02X10-3)=11.275mL/(mol-cm)=1.1275x104L/(mol.cm)实验讨论：在本次实验中,比色也在换装不同浓度的溶液时,必须用待测的溶液润洗至少三次,装入四分之三或五分之四左右,放入分光光度计样品室前,必须用吸收纸将外表擦拭十净,每更换一次比色皿•要急时调零,等示数稳定后,再读取数据.我们组绘制吸收曲线时,最开始选择的吸收波长是502nm,但是经过我们重新实验,发现第二次数据和第一次数据完全不同,吸收波长也由502nm变为了了508nm,可能是由于第一次实验操作不标准,再加上仪器的不稳定造成的.
VIP
