第三章菌种的分离筛选1.菌种来源2.分离方法3.菌种保藏4.菌种复壮典型的微生物新种分离筛选过程第一节菌种来源1.向菌种保藏机构索取有关菌株，从中筛选所需菌株。国内主要菌种保藏机构：AS—中国科学院微生物研究所CMCC—中国医学细菌保藏管理中心CVCC—兽医微生物菌种保藏管理中心IA—中国医学科学院抗菌素研究所IANP—华北制药厂抗菌素研究所ID—中国医学科学院皮肤病防治研究所、CAMS—中国医学科学院流行病学微生物研究所IFFI—轻工业部食品发酵工业科学研究所等。国外主要的菌种保藏机构ATCC—美国标准菌种收藏所NIH—美国国立卫生研究院NRRL—美国农业部北方开发利用研究所CMI—英联邦真菌研究所，CSH—美国冷泉港实验室IAM—日本东京大学应用微生物研究所，IFO—日本大阪发酵研究所，KCC—日本科研化学有限公司，NCTC—英国国立标准菌种收藏所WB—美国威斯康星大学细菌学系等。2.由自然界（土样、水、动植物体等）采集样品，从中进行分离筛选。不可培养微生物是指目前尚不能实现人工培养的微生物。原因可能为尚不了解该类微生物的营养需求和生长需要的理化环境。目前人类认识和培养的微生物还不到其存在种类的1%。3.从发酵制品中分离目的菌株。如从酱油中分离蛋白酶产生菌，从酒醪中分离淀粉酶或糖化酶产生菌等。采样过程（一）从土壤中采样要考虑土壤的有机质含量和通气状况、酸碱度和植被状况、地理条件和季节条件。用采样铲采集5-25cm（北方干燥的土壤，采集10-30cm）土样10-25g，装入事先准备好的塑料袋内扎好，并编号，记录采集地点、土壤质地、植被名称、采集时间等。土样采集后要尽快分离，否则可取3-4g撒到事先准备好的选择性培养基试管斜面，避免菌株因不能及时分离而死亡。根据微生物生理特点采样1.根据微生物营养类型采样（1）微生物的营养要求和代谢类型与其生长环境有很大的相关性森林土壤富含纤维素，可分离纤维素酶产生菌；肉类加工厂附近和饭店排水沟的污水、污泥中，能分离到蛋白酶和脂肪酶产生菌；面粉加工厂、糕点厂、酒厂及淀粉加工厂等，容易分离到产生淀粉酶和糖化酶的菌株；从果园土和腐烂的柑橘、草莓及山芋中，容易分离到果胶酶产生菌。（2）若要筛选代谢合成某种化合物的微生物，从大量使用、生产或处理这种化合物的工厂附近采集样品，容易得到满意的效果在油田附近的土壤中容易筛选到利用碳氢化合物为碳源的菌株；有人从含油污泥中筛选出能以20#机械润滑油为唯一碳源的3株石油降解菌株；曾从乙烯氯化物的工厂附近分离到以乙烯氯化物为唯一碳源的分支杆菌。（3）不少微生物对碳源的利用是不完全专一的。如一些油田微生物也可利用一些糖类为碳源等。2.根据微生物的生理特性采样筛选高温酶产生菌，要到温度较高的地区，或温泉、火山爆发处及堆肥中采样；分离低温酶产生菌要到南北极、冰窖、深海等寒冷的地方采样；分离耐压菌要到海洋底部采样；分离耐高渗的酵母菌，要到甜果、蜜饯或甘蔗渣堆积处采样等。特殊环境下采样1.局部环境的影响寒冷地区的温泉或堆肥中，也可分离到高温微生物；氧气充足的土层中，也能分离到兼性厌氧微生物。海洋独特的高盐度、高压力、低温及光照条件，使海洋微生物具备特殊的生理活性，相应也产生了一些不同于陆地来源的特殊产物。海洋表层多为好气异养菌，底层由于有机质丰富，H2S含量高，厌气性腐败菌和硫酸盐还原菌较多，中间层多有紫硫菌。如前苏联学者发现，20-50%的海鞘、海参体内的微生物可产生具有细菌毒性和杀菌活性的化合物；日本发现深海鱼类肠道内的嗜压细菌，80%以上的菌株可产生EPA（二十碳五烯酸）和DHA（二十二碳五烯酸），最高产量可达36%和24%。具有特殊性质的微生物通常分布在一些特殊的环境中。有人从侵蚀木船的一种蠕虫肠道中分离到既能固氮又能降解纤维素的微生物。从考拉肠道分离到萜烯分解酶的产生菌。从美国得州中南部的一个岩洞中分离到嗜碱性的，能进行氨氧化和产生几丁质酶的微生物。2.极端环境条件的影响生长在高温、低温、高酸、高碱、高盐、高辐射强度等极端环境的微生物，具有不同于一般微生物的遗传特性、特殊结构和生理技能，在冶金、采矿及特殊...
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