正交试验优选荔枝草中总黄酮的提取工艺摘要:目的:对荔枝草中总黄酮的提取工艺进行优化。方法:使用芦丁为对照品,利用紫外分光光度法检测荔枝草中总黄酮的含量。在单因素试验考察溶剂的基础上,采用L9(34)正交试验法优化荔枝草中总黄酮的提取工艺,此次探索的影响因素主要有:溶剂浓度、提取温度、溶剂用量和提取时间。结果得到最佳提取工艺为:添加20倍量的70%C2H5OH,80℃提取120分钟,总黄酮提取率为6.86%。结论:优化后的提取工艺整体简便、准确、重复性好,可用于工业上荔枝草中总黄酮提取。关键词:荔枝草;正交试验;总黄酮;提取工艺荔枝草是唇形科鼠尾草属植物荔枝草SalviaplebeiaR.Br.的全草,荔枝草中的主要成分包括:黄酮、木质素、酚类、挥发油和甾醇等各种成分[1]。荔枝草性凉,在医药方面的作用主要包括清热解毒、凉血利尿、消除水肿等;同时还可以用来治疗痔疮肿痛、乳腺炎、出血、跌打损伤、痈疮湿疹等症状[2];临床上可以用来治疗急性扁桃体炎、阴道炎、宫颈糜烂等[3]。本文主要通过单因素试验和正交试验,对荔枝草中总黄酮的提取工艺进行了优化。1材料1.1仪器试药荔枝草药品来自于广西大明山,芦丁(中国食品药品检定研究院),试剂等均为分析纯。2方法和结果总黄酮含量测定[5]对照品芦丁溶液的制备准确称取10.9mg的芦丁标准样品,将标准样品置于50mL的容量瓶中,再滴加70%C2H5OH于容量瓶中,将标准品进行超声溶解,之后用C2H5OH溶液定容至刻度线,即得到0.218mg/mL的芦丁标准品溶液。供试品溶液的制备准确称取2g荔枝草全草,撕碎后放入500mL的圆底烧瓶中,称取20mL70%C2H5OH溶液加入圆底烧瓶,之后将烧瓶置于水浴锅上连续回流提取2次,每次反应1.5h,结束后趁热滤过,合并滤液并稀释,倒入100mL的容量瓶中,用C2H5OH溶液定容至刻度线,即得到样品待测液。最大吸收波长的选择分别准确地吸取一定量的荔枝草提取液、对照品溶液和70%C2H5OH溶液,并分别放置于三个25mL的5%NaNO2mL10%的Al(NO3)3mL4%的NaOH溶液,最后用70%C2H5OH溶液定容至容量瓶的刻度线,后放置15min。将配制好的溶液按照紫外可分光光度法进行试验,在400~700nm的波长范围内扫描。结果表明,荔枝草提取液在500nm波长处存在最大吸收峰,芦丁溶液在502nm波长处存在最大吸收峰,空白对照样品在此处不存在吸收峰,所以确定最大吸收波长为500nm(图A、B、C)。2.1.4标准曲线的制作分别准确吸取1、2、4、6、8mL的芦丁对照品溶液,滴入5个25mL的mL5%的NaNO2滴加入各容量瓶中,颠倒几次容量瓶使溶液混合均匀后静置6min,然后再在容量瓶中分别滴加入10%的Al(NO3)3各mLmL4%的NaOH,最后用70%的乙醇溶液定容,至容量瓶刻度线,摇匀后放置15min。同时制备空白实验进行对照,在吸收波长为500nm处测定吸光度(A),平行测试取平均值。以芦丁对照品溶液的质量浓度(c)为横坐标,吸光度(A)为纵坐标,绘制标准曲线,根据实验结果,得到回归方程为A=0.0111c+0.0085(R=0.9991,n=5)。结果表明,芦丁溶液的质量浓度在~69.76μg·mL-1范围内与吸光度呈现良好的线性关系。表1-1为测定的吸光度,图1-1为绘制的标准曲线。2.1.5精密度试验准确吸取5份芦丁对照品溶液,按2.1.3项显色,记录连续测定的5次吸光度,取平均值,RSD=0.4%(<2%),结果见表1-2。2.1.6稳定性试验准确吸取1mL荔枝草溶液滴加于25mL容量瓶中,按2.1.3项显色后,存放在室温下,在0,10,20,30,40,50,60min后,测定荔枝草溶液吸光度,RSD=0.62%(<2%)。实验结果显示,在60min内,荔枝草溶液中总黄酮含量能稳定显色,结果如表1-3所示。2.1.7重复性试验准确称量6份荔枝草药材样品,每份1g,按照2.1.2项下方法制备6份待测样,并按2.1.3项显色,测定吸光度6次,RSD=0.12%(<2%),说明重复性较好,表1-4为重复性实验结果。2.1.8加样回收率试验使用加样回收法,精准称取适量的,已知含量的荔枝草样品,之后加入适量的芦丁对照品,根据试品溶液的制备项下操作,总共测定6份样品,表1-5为加样回收率结果。2.2单因素法优选总黄酮提取工艺2.2.1乙醇浓度对总黄酮含量的影响在提取温度为80℃,料液比为1:10,提取时间为1.5h条件下,分别称取5份8...