正交试验优选荔枝草中总黄酮的提取工艺摘要：目的：对荔枝草中总黄酮的提取工艺进行优化。方法：使用芦丁为对照品，利用紫外分光光度法检测荔枝草中总黄酮的含量。在单因素试验考察溶剂的基础上，采用L9（34）正交试验法优化荔枝草中总黄酮的提取工艺，此次探索的影响因素主要有：溶剂浓度、提取温度、溶剂用量和提取时间。结果得到最佳提取工艺为：添加20倍量的70%C2H5OH，80℃提取120分钟，总黄酮提取率为6.86%。结论：优化后的提取工艺整体简便、准确、重复性好，可用于工业上荔枝草中总黄酮提取。关键词：荔枝草；正交试验；总黄酮；提取工艺荔枝草是唇形科鼠尾草属植物荔枝草SalviaplebeiaR.Br.的全草，荔枝草中的主要成分包括：黄酮、木质素、酚类、挥发油和甾醇等各种成分[1]。荔枝草性凉，在医药方面的作用主要包括清热解毒、凉血利尿、消除水肿等；同时还可以用来治疗痔疮肿痛、乳腺炎、出血、跌打损伤、痈疮湿疹等症状[2]；临床上可以用来治疗急性扁桃体炎、阴道炎、宫颈糜烂等[3]。本文主要通过单因素试验和正交试验，对荔枝草中总黄酮的提取工艺进行了优化。1材料1.1仪器试药荔枝草药品来自于广西大明山，芦丁（中国食品药品检定研究院），试剂等均为分析纯。2方法和结果总黄酮含量测定[5]对照品芦丁溶液的制备准确称取10.9mg的芦丁标准样品，将标准样品置于50mL的容量瓶中，再滴加70%C2H5OH于容量瓶中，将标准品进行超声溶解，之后用C2H5OH溶液定容至刻度线，即得到0.218mg/mL的芦丁标准品溶液。供试品溶液的制备准确称取2g荔枝草全草，撕碎后放入500mL的圆底烧瓶中，称取20mL70%C2H5OH溶液加入圆底烧瓶，之后将烧瓶置于水浴锅上连续回流提取2次，每次反应1.5h，结束后趁热滤过，合并滤液并稀释，倒入100mL的容量瓶中，用C2H5OH溶液定容至刻度线，即得到样品待测液。最大吸收波长的选择分别准确地吸取一定量的荔枝草提取液、对照品溶液和70%C2H5OH溶液，并分别放置于三个25mL的5％NaNO2mL10％的Al(NO3)3mL4%的NaOH溶液，最后用70%C2H5OH溶液定容至容量瓶的刻度线，后放置15min。将配制好的溶液按照紫外可分光光度法进行试验，在400～700nm的波长范围内扫描。结果表明，荔枝草提取液在500nm波长处存在最大吸收峰，芦丁溶液在502nm波长处存在最大吸收峰，空白对照样品在此处不存在吸收峰，所以确定最大吸收波长为500nm（图A、B、C）。2.1.4标准曲线的制作分别准确吸取1、2、4、6、8mL的芦丁对照品溶液，滴入5个25mL的mL5％的NaNO2滴加入各容量瓶中，颠倒几次容量瓶使溶液混合均匀后静置6min，然后再在容量瓶中分别滴加入10％的Al(NO3)3各mLmL4%的NaOH，最后用70%的乙醇溶液定容，至容量瓶刻度线，摇匀后放置15min。同时制备空白实验进行对照，在吸收波长为500nm处测定吸光度（A），平行测试取平均值。以芦丁对照品溶液的质量浓度（c）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制标准曲线，根据实验结果，得到回归方程为A=0.0111c+0.0085(R=0.9991，n=5）。结果表明，芦丁溶液的质量浓度在~69.76μg·mL-1范围内与吸光度呈现良好的线性关系。表1-1为测定的吸光度，图1-1为绘制的标准曲线。2.1.5精密度试验准确吸取5份芦丁对照品溶液，按2.1.3项显色，记录连续测定的5次吸光度，取平均值，RSD=0.4％（<2%），结果见表1-2。2.1.6稳定性试验准确吸取1mL荔枝草溶液滴加于25mL容量瓶中，按2.1.3项显色后，存放在室温下，在0，10，20，30，40，50，60min后，测定荔枝草溶液吸光度，RSD＝0.62%（<2%）。实验结果显示，在60min内，荔枝草溶液中总黄酮含量能稳定显色，结果如表1-3所示。2.1.7重复性试验准确称量6份荔枝草药材样品，每份1g，按照2.1.2项下方法制备6份待测样，并按2.1.3项显色，测定吸光度6次，RSD=0.12%（<2%），说明重复性较好，表1-4为重复性实验结果。2.1.8加样回收率试验使用加样回收法，精准称取适量的，已知含量的荔枝草样品，之后加入适量的芦丁对照品，根据试品溶液的制备项下操作，总共测定6份样品，表1-5为加样回收率结果。2.2单因素法优选总黄酮提取工艺2.2.1乙醇浓度对总黄酮含量的影响在提取温度为80℃，料液比为1：10，提取时间为1.5h条件下，分别称取5份8...
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