第1页共6页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第1页共6页拟南芥基因克隆的策略与途径拟南芥（Arabidopsisthaliana）是一种模式植物，具有基因组小（125Mbp）、生长周期短等特点，而且基因组测序已经完成（TheArabidopsisGenomicInitiative,2000）。同时，拟南芥属十字花科（Cruciferae），具有高等植物的一般特点，拟南芥研究中所取得成果很容易用于其它高等植物包括农作物的研究，产生重大的经济效益，特别是十字花科中还有许多重要的经济作物，与人类的生产生活密切相关，因此目前拟南芥的研究越来越多地受到国际植物学及各国政府的重视。基因(gene)是遗传物质的最基本单位,也是所有生命活动的基础。不论要揭示某个基因的功能,还是要改变某个基因的功能,都必须首先将所要研究的基因克隆出来。特定基因的克隆是整个基因工程或分子生物学的起点。本文就基因克隆的几种常用方法介绍如下。1、图位克隆Map-basedcloning,alsoknownaspositionalcloning,firstproposedbyAlanCoulsonoftheUniversityofCambridgein1986,Geneisolatedbythismethodisbasedonfunctionalgenesinthegenomehasarelativelystableloci,intheuseofgeneticlinkageanalysisorchromosomalabnormalitiesofseparategroupswillqueueintothechromosomeofaspecificlocation,Byconstructinghigh-densitymolecularlinkagemap,tofindmolecularmarkerstightlylinkedwiththeaimedgene,continuedtonarrowthecandidateregionandthenclonethegeneandtoclarifyitsfunctionandbiochemicalmechanisms.图位克隆（map-basedclonig）又称定位克隆（positoinalcloning），1986年首先由剑桥大学的AlanCoulson提出。用该方法分离基因是根据功能基因在基因组中都有相对较稳定的基因座，在利用分离群体的遗传连锁分析或染色体异常将基因伫到染色体的1个具体位置的基础上，通过构建高密度的分子连锁图，找到与目的基因紧密连锁的分子标记，不断缩小候选区域进而克隆该基因，并阐明其功能和生化机制。用该方法分离基因是根据目的基因在染色体上的位置进行的，无需预先知道基因的DNA序列，也无需预先知道其表达产物的有关信息。它是通过分析突变位点与已知分子标记的连锁关系来确定突变表型的遗传基础。近几年来随着拟南芥基因组测序工作的完成，各种分子标记的日趋丰富和各种数据库的完善，在拟南芥中克隆一个基因所需要的努力已经大大减少了（图1）。第2页共6页第1页共6页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第2页共6页目前完成整个拟南芥的图位克隆过程大约需要一年时间。在这个过程中，我们从筛选突变体开始，逐渐找到和表型相关的基因。这和反向遗传学（reversegenetics）的方法正好相反。图位克隆能实现，关键在于全基因组测序计划的完成和各种分子标记的发现。这些数据被储存在专门的数据库中（表1）（Lukowitz等，2000）。表1拟南芥网络资源网站网址SupplementalmaterialforthispaperNottinghamStockCentre（U.K.）RecombinantInbredmapOhioStockCenter（U.S.A.）TAIRdatabase*，homepageRecombinantInbredmap（mirrorsite）CAPSmarkershttp://SequencetableSNPcollectionCEREONcollectionofpolymorphismsSSLPmarkersTIGR，genomeannotationsDatabaseofLersequencesKasuzaDNAResearchInstitute，genomeannotationsMIPSgenomeannotationssvr.mips.biochem.mpg.de/proj/thal/SINSdatabaseoftransposoninsertions*注：TheArabidopsisInformationResource（TAIR）在拟南芥中的图位克隆，在很大程度上得益于对Col-0生态型测序的完成，因为它是在研究拟南芥时最常用的生态型。实现基因图位克隆的关键是筛选与目标基因连锁的分子标记。实质上，分子标记是一个特异的DNA片段或能够检出的等位基因，对其有效地利用即可达到图位克隆基因之目的。迄今为止，已有几十种技术可用于分子标记的筛选（Wang等，2000）。其中最为常用的是简单序列长度多态性（SSLPs）和单核苷酸多态性（SNPs）。SSLP是基于PCR的分子标记，在拟南芥基因组中有较多分布，而且是共显性的，它的检测非常直接，但是我们需要...
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