高效液相色谱仪操作规程原理:高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中做相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。仪器:名称 LC-20AD 高效液相色谱仪,分硬件与软件两个部分,硬件:DGU-20A、LC-20AD、SIL-20A、SPD-20A、CTO-20AC 五个模块,软件 labsolutions工作站。硬件脱气机、泵、自动进样器、托盘、柱温箱每天来1、开机(按钮左下角)2、流动相放好。流动相水相:一般纯化水、超纯水、哇哈哈、条件好屈臣氏,水相每天现配最好。有机相:色谱级试剂上机之前流动相先过滤(0.45pm 以下滤膜),然后超声 10-20min。托盘上五根管道,ABCD 用于放流动相,一般情况四根用两根 A-B、A-C,岛津仪器最好 A 与其他搭配,便于设参数,具体流动相中药依据药典。另一个无标识为自动进样器清洗液,一般是 50%甲醇水(反相系统),正相系统则与流动相同,正反相转化①先用流动相过①用异丙醇过滤①用甲醇水。补充:正相色谱法采用极性固定相(如聚乙二醇、氨基与腈基键合相);流动相为相对非极性的疏水性溶剂(烷烃类如正已烷、环已烷),常加入乙醇、异丙醇、四氢咲喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物(如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等)。反相色谱法:一般用非极性固定相(如 C18、C8);流动相为水或缓冲液,常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢咲喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物。RPC 在现代液相色谱中应用最为广泛,据统计,它占整个 HPLC 应用的 80%左右。3、拧松黑色排气阀。拧松黑色排气阀,之后点击两次 purge,分别为泵单元上按钮与自动进样器上purge 按钮,注:泵单元上按钮点击时,流动相管道用的哪些,purge 那些,可于工作站上面设置。比如用的 A 与 B,先 purgeA,之后 purgeB。purge 之后一定要拧紧黑色排气阀,非 purge 下,拧紧,否则不出峰。关于泵单元,一般泵的压力范围 0.2MPa,压力故障大部分是由于单向阀造成的,清洗单向阀(90%水+10%的甲醇超...