五味子提取物抑菌作用讨论论文 1 资料与方法 1.1 菌种与培育基试验菌为金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯氏菌，由浙江省台州医院微生物实验室友情赠送。牛肉膏蛋白胨培育基按文献［4］自制，PH 为 6.0（用 PBS配制［5］）。 1.2 五味子提取物的制备五味子饮片购自临海市医药有限公司，经 70℃烘干后研成粉末。取粉末 10g 用 75％乙醇在超声波清洗器中提取，反复多次，直至浸出液色淡。将浸出液浓缩，并定容到 10ml，即 1ml 提取液为 1g 五味子的提取物［6］。提取液过0.22μm 滤膜除菌，4℃贮存备用。 1.3 抑菌试验 1.3.1 抑菌效力的测定将供试菌从斜面转接到 5ml 液体培育基，30℃培育 24h，吸取 50μl 到 5ml 液体培育基，30℃培育 6h 后取 100μl 菌液均匀涂布到平板上；再贴上滤纸圆片（φ6mm，提取液浸 24h 后风干），每皿 4 片，重复 3 次。37℃倒置培育 24h 后测定抑菌圈大小，用无菌水作空白对比，确定抑菌效果。 1.3.2 最低抑菌浓度（MIC）的测定采纳二倍稀释法［7］测定提取物对供试菌的 MIC。取 7 支试管，第 1 支加入 10ml 提取液，其余 6 支各加入 5ml 无菌水，从第 1 支吸取 5ml 提取液移至第 2 支，混匀后，再吸取 5ml 至第 3 支，以此类推，最后 1 支试管取出 5ml弃去，每一试管的浓度分别为 1000、500、250、125、62.5、31.3和 15.6mg/ml。分别将 5ml 上述各浓度的提取物与 20ml 牛肉膏固体 培 育 基 混 匀 ， 制 成 提 取 物 的 浓 度 分 别 为200、100、50、25、12.5、6.3 和 3.2mg/ml（w/v）的平板，接种菌液后倒置培育 24h 观察，以没有供试菌生长的最低浓度为提取物的 MIC。 1.3.3 热稳定性试验将五味子提取液置于 80℃水浴、100℃水浴 和 121℃ 湿 热 条 件 下 ［ 8 ］ 热 处 理 20min ， 再 制 成 浓 度 为500mg/ml 的提取液浸泡滤纸片，稍风干后贴在涂有菌液的平板中，测定其抑菌效果。 2 结果与分析 2.1 提取物浓度对抑菌效力的影响滤纸片法测定结果（见表1）显示，五味子提取物对 4 种供试菌的生长均有很强的抑制作用，其中对绿脓杆菌的抑制作用最强，肺炎克雷伯氏菌其次，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌最弱。 表 1 五味子提取物的浓度对抑菌效率的影响（略） 2.2 不同菌的 MIC 提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯氏菌的 MIC 值如表 2...
