深低温冻存肝细胞癌样本的核糖核酸质量控制研究[摘要] 目的 探索上海东方肝胆外科医院肝癌样本库低温冻存 0～10 年肝细胞癌样本的核糖核酸的质量。方法 随机抽取 2008 年至 2017 年间库存手术切除肝细胞癌标本 30 份。1％琼脂糖凝胶电泳和 RIN 值评估法检测 RNA 完整性。 结果 将组织标本按冻存年限分成 4 组(<2 年、3～5 年、6～8 年和>9年)，各组间的 RNA 浓度无显著性差异(P>0.05)，各组之间 A260/A280 差异无统计学意义(P>0.05)，四组之间的 RIN 值检测显示，冻存 5 年以上组的RIN 值有明显下降(P<0.05)。 结论 长期低温时间超过 5 年后的肝细胞癌患者的肿瘤标本 RNA 存在严重的降解。[关键词] 生物样本；肝细胞癌；低温保存；核糖核酸；质量控制；前言肿瘤分子生物学与转化医学研究对高质量新鲜肿瘤标本的需求日益增长，生物样本库建设是后基因组时代的重要课题。全球范围内各研究机构建立有较为完善的肿瘤生物标本库(1-5 )，不仅为肿瘤基础与临床研究提供重要的标本，并在核酸与蛋白质的提取、分析和建立肿瘤细胞系方面取得成果(6-8 )。上海市东方肝胆外科医院肝癌样本库自 2008 年起开展肝癌生物样本库建设，在阐明肝癌发生的分子机制上提供了大量有价值的生物样本(9-15 )。目前，有较大比例生物样本保存时间已经长达 10 年之久。为分析长期冷冻保存肿瘤样本是否适合分子生物学实验，本文探讨了低温样本库的储存年限与核糖核酸的分子完整性关系，以期为高质量生物样本库建设以及肿瘤转化医学研究提供参考。1 材料与方法1.1 肝细胞癌样本 随机抽取上海市东方肝胆外科医院肝癌样本库中 2008 年至 2017 年间库存手术切除肝细胞癌肿瘤标本 30 份。所有样本均为我院肝癌外科资深医师行肝癌根治术切取的肝癌标本，标本离体后 30min 内取材、分装在低温冻存管后投于液氮内，然后转入-80℃深低温冰箱保存。低温冻存时间在 0 至 10 年不等。样本编号 T 代表肝细胞癌组织。所有患者术前均未接受放化疗。标本编号与储存时间的对应关系见表 1。表 1：标本编号与低温储存时间的对应关系储存年份组织样本储存时间 (年）T(肿瘤组织)200808-1T08-2T08-3T﹑﹑10200909-1T09-2T09-3T﹑﹑9201010-1T10-2T10-3T﹑﹑8201111-1T11-2T11-3T﹑﹑7201212-1T12-2T12-3T﹑﹑7201313-1T13-2T13-3T﹑﹑5201414-1T14-2T14-3T﹑﹑4201515-1T15-2T15-3T﹑﹑3201616-1T16-2T16-3T﹑﹑2201717-1T17-2T17-3T...
