稳转株的制备实验原理：利用哺乳动物系统生产蛋白的方式有两种：瞬时转染和稳转株筛选。通过稳定细胞系构建筛选稳定表达细胞株。针对瞬时转染，外源基因在短时间转录翻译得到的蛋白量较少，能够满足小量蛋白制备，大量生产成本很高。相对于此，稳定转染的是将外源基因整合到细胞自身的基因组上，随着细胞的生长分裂外源基因可以稳定转染表达，同时经过抗生素加压筛选，最终得到能够稳定转染表达蛋白的细胞株稳转株生产蛋白稳定性更好，批次差异性更小。稳定转染的应用稳定转染适用原因稳定转染应用外源基因要整合到细胞染色体上基因敲除以及基因插入突变筛选等修饰基因组的研究细胞之间存在个体差异，同一类型细胞，不同个体细胞基因组单克隆稳转株筛选外源基因未整合到细胞会导致注射入动物体内后，外源基因片段很快丢失需要在动物体体内注射已经表达外源基因的细胞一些蛋白稳定性很强，瞬时RNA 干扰作用周期短，无法去除已需要通过稳转株筛选，实现更好的基因干扰效果经表达的目的蛋白稳转株筛选很大程度上降低频繁转染或者病毒包装的成本，也很大程度上方便实验研究在某些细胞中长期研究基因的功能通过稳转株师选，能使那些病毒载体也无法达到高转导效率的细胞咼效表达外源片段获得外源片段的咼效表达避免引入人为因素影响实验结果的精确性，稳转株筛选有助于师选出拷贝数适量的细胞得到过表达的目的基因或干扰拷贝数影响稳定转染的因素1、外源基因整合的几率决定了稳转株筛选的简易程度，有利于稳定转染细胞的获得；2、插入外源基因片段的拷贝数一般情况下，低拷贝或者单拷贝可以降低人为因素的干扰；3、整合位点转录活跃度整合位点转录活跃度决定了稳转株筛选细胞后稳转株中外源基因片段的表达质量；4、外源基因片段整合到细胞后的稳定性不同的整合位点决定了外源片段在染色体中的稳定性，有些区域易发生重组或者丢失，从而使稳转株筛选后出现丢失的现象。制备稳转株的实验步骤一．准备及预实验1、确定细胞系相关信息：需包括如下内容细胞系名称细胞培养条件细胞增殖速度支原体污染情况注：务必保证细胞无支原体污染，方可进行稳转株构建！2、查阅慢病毒感染该细胞的 M01 值3、预实验确定筛选药物用量：（1）查阅 Puromycin/Blastincidin 在目的细胞中稳转株筛选的致死用量信息；参考查阅得到的数据，确定 3 个药物浓度梯度（如没有相关信息，则需将药物浓度梯度范围增大，数量增多至 6 个）；（2）D0 将细胞铺于 6 孔板中，使 D...
