精品文档---下载后可任意编辑PRRSV GDQYI 株的体外传代变异及全长 cDNA 克隆载体的构建的开题报告本文计划讨论 PRRSV GDQYI 株的体外传代变异及全长 cDNA 克隆载体的构建。具体目的如下：1. 通过体外传代将 PRRSV GDQYI 株在细胞培育基中连续传代，观察其基因序列变异情况并筛选出变异较大的株系。2. 从筛选出的变异较大的株系中提取 RNA，借助 RT-PCR 扩增获得其全长 cDNA 序列。3. 将全长 cDNA 序列克隆到载体中，构建 PRRSV GDQYI 株的全长cDNA 克隆载体，以期在讨论中更好地应用。讨论方法如下：1. 筛选出变异较大的 PRRSV GDQYI 株系，并进行体外传代操作。选取其中的样本进行 RNA 提取，借助 RT-PCR 扩增，得到全长 cDNA 序列。2. 构建全长 cDNA 克隆载体，选用 TA 克隆方法将全长 cDNA 序列插入到载体中。使用 DNA 测序确认克隆载体中的序列与之前扩增的序列一致。3. 对 PRRSV GDQYI 株全长 cDNA 克隆载体进行验证。使用现有的病毒感染模型，感染细胞并观察感染情况。检测感染后的病毒 RNA 和蛋白的表达情况，以确认 PRRSV GDQYI 株全长 cDNA 克隆载体的可行性。预期成果：1. 筛选出变异较大的 PRRSV GDQYI 株系，为后续讨论提供基础。2. 构建 PRRSV GDQYI 株的全长 cDNA 克隆载体，使其在病毒学讨论中更加便捷。3. 对全长 cDNA 克隆载体进行验证，得到 PRRSV GDQYI 株的感染情况和表达情况，为对该病毒的更深化讨论提供基础。
