生物化学实验考核设计方案唾液淀粉酶最适pH值的测定实验小组成员:刘倍材何标才揭春晓李芮实验目的：1.掌握设计性实验的基本思路，并完成设计报告。2.掌握唾液淀粉酶最适PH的测定原理和方法。3.熟悉影响酶促反应速度的因素。实验原理：1．酶促反应速度受到许多因素的影响，如温度、PH、激动剂和抑制剂等。上述诸因素对唾液淀粉酶催化淀粉水解反应速度的影响，可用定性或定量的反应来观察。利用碘与淀粉机器不同程度纾解产物反应的颜色，来衡量酶促反应的速度的快慢。蓝色—紫红色—黄色，颜色由蓝变黄，表示酶促反应速度由慢到快。此为定性观察。2.进一步利用郎伯—比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液的浓度符合一定的比例关系。由于在被水解的程度也不一样。当唾液淀粉酶不能将完全水解时，淀粉遇碘呈蓝色，吸收波长位于660nm处。不同PH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同，吸光度值也不同。因此，通过测量660nm处的吸光度值，可以了解PH对酶促反应的影响，吸光度最小的溶液其PH即为唾液淀粉酶的最适PH。1生物化学实验考核设计方案实验步骤：1.缓冲溶液的配制。取12支试管进行编号1-12，分别按下表加入试剂。编号123456PH5.86.06.26.46.66.80.2mol/LNa2HPO4(ml)0.400.620.931.331.882.450.2mol/LNaH2PO4(ml)4.604.384.073.673.122.55蒸馏水5.005.005.005.005.005.00编号789101112PH7.07.27.47.67.88.00.2mol/LNa2HPO4(ml)3.053.604.054.354.584.740.2mol/LNaH2PO4(ml)1.951.400.950.650.420.26蒸馏水5.005.005.005.005.005.002.唾液的采集。2生物化学实验考核设计方案先给备取者一杯纯净水让其漱口，将漱口液吐掉,让备取者下嘴唇抵住干净的杯子口，在备取者眼前放上一些话梅，这时，备取者的唾液会不停地流出来。3.唾液的稀释。取10支试管，进行编号1＇-10＇,进行稀释。编号1＇2＇3＇4＇5＇6＇7＇8＇9＇10＇唾液（ml）0.10.10.10.10.10.10.10.10.10.1蒸馏水（ml）2.04.06.08.010.012.014.016.018.020.04.唾液稀释倍数的选取。另取10支试管，分别编上A-K号，各取上述稀释的唾液各1ml，分别加入相应编号的试管里，向10支试管内同时加入1ml的0.02％的淀粉溶液，振荡混匀后放入37C恒温水浴5分钟后取出，滴加2～3碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变化适中的一支，记录稀释倍数。3生物化学实验考核设计方案5.最适PH的测定。另取12支试管,进行编号,按下表加入试剂。进行测定。编号1234567891011120.02％淀粉溶液(ml)1111111111113ml缓冲溶液pH5.86.06.26.46.66.87.07.27.47.67.88.037摄氏度水浴10分钟稀释唾液(ml)11111111111137摄氏度水浴2分钟,取出,分别加入2-3滴碘液,以蒸馏水作为对照管,用660nm波长测定吸光度A6606.结果分析当在最适PH下反应时,淀粉被水解最完全,剩余最少,颜色最浅,吸光度最小,所以吸光度最小对应的PH为最适PH。思考讨论:1.2.4
