本科学生实验报告学号： 124120463 姓名：学院：生命科学学院专业、班级： 12级生物技术班实验课程名称：酶工程实验一教师：吴倩云南师范大学教务处编印实验一淀粉酶产生菌的分离及酶活性测定一、目的要求1、掌握从土壤中分离酶产生菌的方法，学会应用微生物生态知识分离产酶微生物。2、掌握淀粉酶活性测定的原理，学会淀粉酶活性的测定方法。二、基本原理（一）淀粉酶产生菌的分离1. 菌种的采集①要获得产生某种酶的菌种，可从富含该酶作用底物的场所去采集。②胞外酶的稳定性和最适反应条件通常和菌的最适生长条件一致，因此要筛选具有某一特性的酶时，只要到相应的环境中采样即可。2. 富集培养①原理：采集到的样品中如果所需的菌很少，需要先经过富集培养，使所需的菌大量繁殖，而不需要的菌则不生长或少生长，以利于筛选。②富集的方法：控制培养的温度、pH和营养成分等。3. 菌种的分离①淀粉与碘液反应会形成蓝色化合物。②淀粉酶能使淀粉分解为葡萄糖，而葡萄糖与碘反应不会形成蓝色化合物，结果可使淀粉酶产生菌周围形成透明圈，从而筛选出淀粉酶产生菌。（二）淀粉酶产生菌的发酵及葡萄糖标准曲线绘制1.原理：根据淀粉酶水解淀粉生成还原性糖，还原糖与 3，5 -二硝基水杨酸共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定的范围内，还原糖的量和反应液的颜色呈比例关系，可利用比色法在540nm 进行测定。2.酶活定义：在一定pH5.5、 37℃条件下，每分钟内从底物溶液中分解释放1μ mol 葡萄糖所需要的酶量为一个酶活单位U/g。酶活计算公式：酶活（ U/g）=A ×5×K×N×1000/（T×W）A:样品的 OD 值(平均值 ) K: 标准曲线的斜率N:稀释倍数5:0.2 毫升反应液转换为 1 毫升体积T:反应时间（ min）1000:转换因子 1mmol=1000μmol W:葡萄糖的分子量（ 180.2g/mol）3 绘制标准曲线①先配制一系列浓度不同的标准溶液，用选定的显色剂进行显色，在一定波长下分别测定它们的吸光度A。②以 A 为横坐标，浓度c 为纵坐标，则得到一条拟合度较好的直线，称为标准曲线。③然后使用用完全相同的方法和步骤测定被测溶液的吸光度，便可从标准曲线上找出对应的被测溶液浓度或含量三、器材1 试剂 : 可溶性淀粉、碘、碘化钾、HCl、柠檬酸、 Na2HPO4· 12H2O等2 培养基 : 分离、纯化培养基3 仪器 : ①平皿、三角瓶、大试管、 1mL 和 10mL移液枪、涂棒；②天平、超净工作台、培养箱、电冰箱、恒温调速摇瓶柜、离心机、恒温水...
