1.PABP:poly(A)结合蛋白,能够结合细胞核RNA和mRNA的poly(A)序列,许多真核生物内部有相关类型的蛋白质。2.What’sitsfunctionofpoly(A)andhowtouseitinexperiments?mRNA3'延伸的多聚腺苷酸经常被描述为poly(A)尾部,有这种特征的mRNA称为poly(A)+).poly(A)序列并非由DNA编码,在细胞核内它是在转录之后被加到RNA上的。Poly(A)被特异的蛋白质PABP结合,有助于稳定mRNA,防止降解;作为核糖体的识别信号,使mRNA分子有效翻译。在试验中的应用:具有poly(A)的mRNA在oligo(dT)引物和反转录酶的作用下,可合成出双链cDNA。随后将它与质粒载体构成重组分子,并转化给大肠杆菌寄主细胞进行扩增。应用这种方法能够分离和扩增我们所期望研究的基因或DNA片段。3.Tocomparetheprocessofproteinsynthesisforprokaryoticandeukaryotic.真核生物蛋白质合成与原核生物两者相比,密码相同,各种组分相似,亦有核糖体、tRNA及各种蛋白质因子。总的合成途径也相似,有起始、延伸及终止阶段,但也有不同之处。⑴原核生物的翻译与转录偶联在一起,即边转录边翻译;而真核生物的翻译与转录不偶联。真核mRNA前体需经加工修饰成为成熟mRNA后,从核内输入细胞质,然后进行翻译。⑵真核生物蛋白质合成机构比原核生物复杂,起始步骤涉及起始因子众多,过程复杂。如起始氨基酸;核糖体组成;起始因子的种类等等。⑶真核生物蛋白质合成的调控复杂。⑷真核生物与原核生物的蛋白质合成可为不同的抑制剂所抑制。4.WhatisTu-Tscycle?EF-Tu一GTP将氨酞-tRNA安置在核糖体上后,以EF-Tu-GDP的形式释放。EF-Ts用来催化GTP与GDP的置换,这个反应消耗GTP,释放GDP。唯一不能被EF-Tu-GTP识别的氨基酸是fMet-tRNAf,两者无法结合可保证后者不能识别内部的AUG或GUG密码子。5.WhatdifferentfeatureshavefortheinitiatortRNA?在细菌和真核生物细胞器中,tRNA起始子(initiator)携带一个氨基基团被甲酰化的甲硫氨酸,称为氨甲酰甲硫氨酰tRNA(NformylmethionyltRNA)。这种tRNA称为tRNAfMet,而这种甲硫氨酰tRNA通常缩写为fMettRNAf。tRNA氨基酸臂末端的几个面对面的碱基在fMettRNAf中是不配对的,而在其他所有tRNA中是配对的。如果在此位置的突变使之可以配对,那么这个MettRNAf也将能参与延伸,因此,此位置的不配对碱基能阻止该tRNA参与延伸,并且,这种不配对特性也是甲酰化反应所需的。在反密码子环前面的臂上存在一系列3个GC碱基对,它是tRNAfMet所特有的,这些碱基对是fMettRNAf直接插入到P位所必需的。1.Thestabilityofpeptidyl-tRNAishigherthanofaminoacyl-tRNA,why?16SrRNA不同位点上的各种碱基被P位上的tRNA所保护。在三维结构上,可能这些碱基是相邻的。实际上,16SrRNA与P位上的tRNA比A位上的tRNA有更多的接触,这可能是肽酰-tRNA比氨酰-tRNA具有更高稳定性的原因。2.Howtoinhibittheprocessoftheproteinsynthesisatparticularstagesbyusingantibiotics?蛋白质LII及23SrRNA的58个碱基组成的复合体提供了一些影响GTP酶活性的抗生素结合位点,也就是说,抗生素可通过调节GTP酶活性而抑制蛋白质的合成。研究同时表明,rRNA参与了部分甚至全部的核糖体催化功能,而一些抗生素就是通过作用于单一的核糖体蛋白将蛋白质合成反应抑制在某个特定阶段。3.wobblehypothesis:摇摆假说解释了一种能力¾tRNA可以识别一种以上密码子的能力,即可同密码子的第三位以非G·C,非A·T的形式配对。4.Howtoprocessthe3¢endandthethe5¢endofatRNA?tRNA3¢端通过切割、修整,再加上CCA而成,过程为:核酸内切酶首先引发前体下游的裂解反应,几个核酸外切酶随之沿3¢到5¢方向降解前体,修剪3¢端。在真核生物中,这个反应也是由多个酶来完成的。这个过程形成了3¢端的tRNA,然后再加上CCA。tRNA的5¢端由核糖核酸酶P(ribonucleaseP)裂解催化而成。5.U、D、A、I:U:尿嘧啶,RNA中的主要组成碱基之一,经过修饰可变为多种修饰碱基。D:二氢尿嘧啶,是由尿嘧啶双键饱和所产生,环的结构发生了变化。I:次黄嘌呤核苷酸(inosine,l)常存在于有嘌呤生物合成途径的细胞中。然而,它并不是直接掺入RNA,相反它是依靠RN...