第七节黑曲霉生产菌的扩大培养第七节黑曲霉生产菌的扩大培养种子：种子：将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,,最终获得最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。称为种子。菌种的扩大培养：菌种的扩大培养：从少量的微生物原种开始，经过束带繁从少量的微生物原种开始，经过束带繁殖培养，为每次发酵提供相当数量的健壮的菌殖培养，为每次发酵提供相当数量的健壮的菌种培养物。种培养物。一、菌种的扩大培养一、菌种的扩大培养种子的要求：总量及浓度能满足要求生理状况稳定活力强，移种至发酵后，能够迅速生长无杂菌污染实验室阶段：不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成，因此将其称为实验室阶段的种子培养。培养基：保证培养基的质量，有利于菌体的生长减少传代次数孢子培养时注意湿度，子斜面使用一般不超过1个月生产车间阶段：种子培养在种子罐里面进行，一般在工厂归发酵车间管理，因此形象地称这些培养过程为生产车间阶段。培养基：控制成本，驯化；营养比发酵培养基丰富。种子扩培的两个阶段1.1.斜面培养斜面培养•培养条件：•有利于菌种的繁殖和孢子生长，不产酸，培养基以“多碳少氮”为原则。•蔗糖合成培养基•严格无菌操作•在斜面上划波浪线，尽量利用斜面培养基2.2.麸曲三角瓶培养麸曲三角瓶培养•培养基制备：•新鲜麸皮过筛，按麸皮：水=1：1拌匀，分装1000ml三角瓶，每瓶40g，纱布封口，0.1MPa表压下灭菌40~60min，摇散冷却。35℃培养1d，无气味异常或染菌即可使用。•培养操作：•无菌操作条件下，将2ml斜面菌种的孢子悬浮液，于32℃下培养20h后，白色菌落盖满表面，摇瓶一次，使培养基疏松、铺平，再培养4h，培养基结块，白色菌丝生长旺盛，但未产生孢子，升温到35℃左右，12h摇瓶一次，知道孢子长出后停止。•麸曲可直接作种子罐种子，也可作为二级种子。•3.孢子悬浮液的制备•将符合质量要求的三角瓶麸皮，在无菌操作下，每瓶加入500ml无菌水，摇匀，切勿将棉塞打湿，在火焰下并入接种罐中。4.4.种子罐扩大培养种子罐扩大培养•（1）种子罐种子培养基（（22）种子培养条）种子培养条件件•①接种量：随发酵罐容积改变。5000L种子罐接入20瓶麸曲孢子（70g麸皮/1000ml）。•②培养温度:35℃左右•③供氧：搅拌转速150r/min，通风量•0.3~0.4m3/min。•④种龄：18~24h•（3）种子质量要求•①镜检：菌丝粗壮，结成菊花状小球体，无异味，无杂菌，无异常菌丝。•②pH2.0~2.5•③酸度：0.5%~2.0%•④柠檬酸含量：0.5g/dL左右二、影响种子质量的因素二、影响种子质量的因素•1.影响斜面种子质量的因素•（1）培养基•（2）C、N源•C源影响•对糖蜜发酵菌种来说：蔗糖最适宜，麦芽着生孢子糖次之，葡萄糖和乳糖不大适宜。•蔗糖浓度40~80g/L。•N源影响：•对糖蜜发酵，优劣次序：硝酸铵＞硫酸铵＞尿素，•对淀粉质原料，硫酸铵或尿素对产酸影响不大。•（3）培养条件与时间•酸性液体培养6d为佳，固体培养6~8d适宜。2.2.影响三角瓶麸曲质量的因素影响三角瓶麸曲质量的因素•（1）麸皮的质量•霉烂、虫咬，灭菌困难•营养成分减少，不利于黑曲霉生长•淀粉蛋白质过多，生长旺盛，但孢子着生减少•水分过多，不利于生长•（2）水分•过少易形成干曲，过多影响疏松度，且热量散发不出，一般麸皮：水1：1.1~1.3.•（3）培养条件•相对湿度60%~70%，温度35℃左右，经常摇瓶及换气。3.3.影响种子罐质量的因素影响种子罐质量的因素•（1）培养基成分•产酸水平随种子培养基成分的加富而提高。•（2）通风量•对10m3罐•0~6h：0.0185~0.0187m3/（m3·min）•17~11h：0.03m3/（m3·min）•12~16h：0.075m3/（m3·min）•19h后：0.094m3/（m3·min）•20~24h：0.145~0.15m3/（m3·min）•24h：0.18m3/（m3·min）
