1病原性球菌的分离鉴定病原性球菌的分离鉴定IsolationandIdentificationofPathogenicCocci病原性球菌分离鉴定程序简介脓标本和咽拭子接种抗链O试验血浆凝固酶试验透明质酸酶试验一、病原性球菌分离鉴定程序简介一、病原性球菌分离鉴定程序简介革兰氏阳性菌革兰氏阴性菌血液骨髓穿刺液、痰、咽拭子、脓液淋病病灶分泌物、脑脊液、末梢血、痰斑肉汤増菌血平板培养需氧培养（Sa）厌氧培养（5%CO2,Sp）菌落观察（色素、溶血性）涂片染色分离单菌落纯培养巧克力平板培养（N.m,N.g)烛缸法培养菌落观察涂片染色分离单菌落纯培养药敏试验进一步鉴定药敏试验病原性球菌检验注意事项病原性球菌检验注意事项严格无菌操作。奈瑟氏球菌标本应当保温保湿，尽快分离培养。有些标本可以离心取沉渣提高检出率。厌氧菌疑似标本应尽量避免空气暴露。实际工作中应根据条件和要求对上述检验程序进行选择和取舍。二、脓标本和咽拭子培养二、脓标本和咽拭子培养咽拭子培养注意事项用灭菌咽拭子在咽部粘膜表面上下滚动，保证棉签头全部浸湿。不要污染其他口腔微生物。用咽拭子前端在血平板边缘处涂布一个1X2cm大小区域，将咽拭子丢弃在石碳酸缸中。小辨法或分区法接种。37℃培养24小时观察结果。三、抗链球菌溶血素三、抗链球菌溶血素OO试验试验试验原理乙链A族球菌可产生溶血素“O”(streptolysinO,SLO)具有溶血作用和较强的抗原性，可刺激机体产生抗溶血素“O”抗体。该抗体在病愈后数月至数年才消失，可做为诊断链球菌感染的辅助手段。试验材料1：50待检血清、2％红细胞悬液等操作步骤试管号123456pH7.2PBS1.800.200.300.000.500.751:50待检血清0.20a0.000.000.000.000.001:500待检血清0.000.300.200.750.000.00从1号试管中弃去0.25ml，以保证1号试管内反应液的总体积与其他试管相同b还原溶血素O0.250.250.250.000.250.00保温将各管内溶液混匀，置37℃水浴箱内5min2％红细胞0.250.250.250.250.250.25保温将各管内溶液混匀，置37℃水浴箱内10min后观察结果血清稀释度及对照1:5001:8331:1250血清对照抗原对照血球对照ASO溶血试验操作单位：mla1:50待检血清加入到1号试管后，被PBS稀释为1:500倍稀释的待检血清。b每管总体积为1ml。四、血浆凝固酶试验四、血浆凝固酶试验实验目的了解致病性球菌的初步鉴定方法。实验原理血浆凝固酶是致病性葡萄球菌产生的使人或兔抗凝血浆产生凝固的酶，非致病葡萄球菌不产生此酶。因此该酶是鉴定葡萄球菌有无致病性的指标之一。实验材料试剂：兔或人1：4稀释之抗凝血浆；金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌接种琼脂平板。实验步骤将抗凝血浆用滴管分别加1滴于载玻片两端，用灭菌接种环取少量金黄色葡萄球菌与一滴血浆混匀，同法取表皮葡萄球菌与另一滴血浆混匀，然后边倾动玻片边观察。阳性反应为：细菌成团聚集不易分开。阴性反应为：血浆呈均匀混浊。五、五、透明质酸酶试验试验试验目的通过观察透明质酸酶对组织的破坏作用，了解细菌的侵袭性。试验原理致病性链球菌可产生多种侵袭酶，其中透明质酸酶可水解组织间质的透明质酸，使结缔组织疏松，通透性增高，利于细菌和病毒的扩散及增强细菌的侵袭力，又称为扩散因子。试验材料白色家兔；乙型溶血性链球菌血清肉汤培养基滤液；过滤墨汁；生理盐水。试验步骤配置试验液（1ml乙型链球菌滤液与2滴过滤墨汁混合液）和对照液（1ml生理盐水和2滴过滤墨汁混合液）家兔腹部消毒后，用注射器取实验液在一侧皮内注射直径为0.5cm皮丘；同法取对照液在另一侧皮内注射直径为0.5cm皮丘，2h后观察结果。预期结果：实验侧皮内黑色区域与对照侧黑色区域比较≧3倍为阳性。
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