营养缺点型菌株的筛选采用辐射,化学试剂等因素解决细菌,以提高其变异几率,核心环节是进行营养缺点型微生物的筛选工作,营养缺点型是指通过诱变产生的,由于发生了丧失某酶合成能力的突变,因而只能在加有该酶合成产物的培养基中才干生长的突变株。营养缺点型的筛选与鉴定涉及下列几个培养基:基本培养基(MM,符号为[-])是指仅能满足某微生物的野生型菌株生长所需的最低成分的合成培养基。完全培养基(CM,符号为[+])是指可满足某种微生物的一切营养缺点型菌株的营养需要的天然或半合成培养基。补充培养基(SM,符号为[A]或[B]等)是指在基本培养基中添加某种营养物质以满足该营养物质缺点型菌株生长需求的合成或半合成培养基。 营养缺点型菌株不仅在生产中可直接作发酵生产核苷酸、氨基酸等中间产物的生产菌,并且在科学实验中也是研究代谢途径的好材料和研究杂交、转化、转导、原生质融合等遗传规律必不可少的遗传标记菌种。营养缺点型的筛选普通要通过诱变、裁减野生型、检出和鉴定营养缺点型四个环节。现分述以下:第一步,诱变剂解决:与上述普通诱变解决相似。第二步,裁减野生型:在诱变后的存活个体中,营养缺点型的比例普通较低。通过下列的抗生素法或菌丝过滤法就可裁减为数众多的野生型菌株即浓缩了营养缺点型。抗生素法 有青霉素法和制霉菌素法等数种。青霉素法合用于细菌,青霉素能克制细菌细胞壁的生物合成,杀死正在繁殖的野生型细菌,但无法杀死正处在休止状态的营养缺点型细菌。制霉菌素法则适合于真菌,制霉菌素可与真菌细胞膜上的甾醇作用,从而引发膜的损伤,也是只能杀死生长繁殖着的酵母菌或霉菌。在基本培养基中加入抗生素,野生型生长被杀死,营养缺点型不能在基本培养基中生长而被保存下来。菌丝过滤法 合用于进行丝状生长的真菌和放线菌。其原理是:在基本培养基中,野生型菌株的孢子能发芽成菌丝,而营养缺点型的孢子则不能。通过过滤就可除去大部分野生型,保存下营养缺点型。第三步,检出缺点型:具体办法诸多。用一种培养皿即可检出的,有夹层培养法和限量补充培养法;在不同培养皿上分别进行对照和检出的,有逐个检出法和影印接种法。可根据实验规定和实验室具体条件加以选用。现分别介绍以下:夹层培养法 先在培养皿底部倒一薄层不含菌的基本培养基,待凝,添加一层混有经诱变剂解决菌液的基本培养基,其上再浇一薄层不含菌的基本培养基,经培养后,对初次出现的菌落用记号笔一一标在皿底。然后再加一层完...