淋巴细胞亚群测定办法 流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特)原理： 双/三色/四色直接免疫荧光法。荧光素标记的多个单克隆抗体加入到全血中，与白细胞膜上对应的抗原结合，通过溶血、洗涤（和固定）等环节后，在流式细胞仪上进行分析，从而得到淋巴细胞亚群的百分数，加入 Flow-Count 即可得出绝对计数。淋巴细胞表面抗原分布以下：T 淋巴细胞：CD3+；B 淋巴细胞：CD3-，CDl9+；辅助性 T 淋巴细胞：CD3+CD4+；克制性 T 淋巴细胞：CD3+CD8+；NK 细胞：CD3-CDl6+56+等。根据淋巴细胞膜上 CD 分子体现的不同，流式细胞仪能够分辨出淋巴细胞及其多个不同的亚群，运用计算机软件计算出淋巴细胞亚群的百分数，加入 Flow-Count 组会自动得出绝对计数。标本采集与解决 受检者的准备 检核对象生活饮食处在日常状态。 采集部位 静脉采血抗凝剂 EDTA 或肝素抗凝血 规定 1．样本量 1ml。 2．样本应在采集后 6 小时内解决，冷冻或溶血的标本不能用。 3．样本白细胞计数应在 4.0-10.0×109/L 之间。若>10.0×109/L， 样 本 需 要 稀 释 ， 用 PBS 稀 释 ； 若<4.0×109/L，应分离单个核细胞。 试剂 品牌 剂型 规格 贮存 贝克曼库尔特成分 1：单克隆抗体 液体 2—8℃ (CD45/4/8/3 No.6607013 CD45/56/19/3 No.6607073 CD4/8/3 No.IM1650 同型对照 IgG1/IgG1/IgG1 No.IM1672 CD3/19 No.IM1293 CD3/16+56 No.IM2076 CD19-PC5 No.IM2643Flow-Count 荧光微球 No.7547053) 2：全血溶血试剂(Q-Prep) 液体(No.7546946) A：甲酸 液体 70ML 室温 B：碳酸钠等 液体 32ML 室温 C：多聚甲醛 液体 14ML 室温 (Optilyse C No.IM1401) 液体 室温 3：鞘液(No.8546859) 液体 20L 室温 4：清洗液(No.8546930) 液体 5L 室温 5：荧光微球(No.6605359) 液体 10ML 2-8℃(Flow-Check) 仪器 BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra 样本制备： 1)按照规定，分别向已编好号的试管中加入 10/20 ul 单克隆抗体和同型对照2)分别向试管中加入混匀的 100u1 抗凝血。3)混匀，避光，室温孵育 20-30 分钟4)溶血：a. OptiLyse C(按阐明书环节溶血) b. 使用 COULTER Q—PREP 制备系统开机---显示 READY 灯亮---选择 35SEC 灯亮---开门---放入试管关门---自动进行溶血---显示 READY 灯亮---开门---取出试管---再进行下一种样品测定。（*溶血前确认 A/B/C 管路充满...
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