1 / 3 3 过 表 达 慢 病 毒 载 体 构 建 和 包 装 手 册 Version1.0 吉 凯 基 因 二 零 一一年五月 2 / 3 3 目 录 简 介 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 3 第 一部分 过表达慢病毒载体的制备 实验流程… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 4 实验材料… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 5 过表达克 隆 制 备 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 6 第 二部分 慢病毒包装与滴度检测 实验流程… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 1 7 实验材料… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 1 8 L e n t i v i r u s 病 毒 包 装 … … … … … … … … … … … … … … … … … … 2 1 病 毒 的 收 获 及 浓 缩 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 2 2 L e n t i v i r u s 滴 度 测 定 … … … … … … … … … … … … … … … … … … 2 4 参 考 文 献 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 3 3 3 / 3 3 简 介 慢病毒(Lentivirus)载体是以人类免疫缺陷型病毒(HIV)为基础发展起来的基因治疗载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力,并可以在体内较长期的表达且安全性高。吉凯基因提供的慢病毒为“自杀” 性病毒,即病毒感染目的细胞后不会再感染其他细胞,也不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒。慢病毒中的毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代,属于假型病毒。但该病毒仍然具有可能的潜在的生物学危险,吉凯基因建议不要使用编码已知或可能会致癌的基因的假型病毒,除非已经完全公认某个基因肯定没有致癌性,否则均不建议采用假型病毒进行生物学实 验 。 吉凯基因慢病毒载体系 统 由GV 慢病毒载体系 列 、pHelper 1.0 载体和 pHelper 2.0 载体三质粒组成。GV 慢载体中含有 HIV...